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慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）是一种常见的慢性气道炎症性疾病，严重危害人类健康。脂联素（Adiponectin）是由脂肪细胞分泌一种重要的脂肪因子，在外周血循环中可见脂联素的全长结构[又分为三聚体、六聚体和高等分子量体构型（HMW）]以及球型结构域（global adiponectin,gAd），却未发现过单体，它能够与其特异性的受体AdipoR1、AdipoR2和T-cadherin结合，发挥抗粥样硬化、抗凋亡、抗炎、保护血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移等积极的保护作用。 关于脂联素在COPD中的生物学作用目前仍存有争议。动物研究显示脂联素具有保护性作用，低脂联素血症会促进COPD的进展，并且脂联素敲除小鼠形成的COPD容易并发肥胖及心血管疾病。而临床研究发现COPD患者脂联素水平增高，以高等分子量体（HMW）脂联素水平增高为主，并且与肺功能的损害程度及TNF-α水平呈正相关。那么，是否不同构型的脂联素在COPD疾病进展中发挥不同的作用或者COPD患者可能存在脂联素受体的表达水平下调及其生物学功能的变化，从而影响脂联素保护性作用的发挥，还需要进一步的科学研究来证实。 有研究提示脂联素受体2（AdipoR2）的表达受miR-150的调控，从而影响脂联素生物学作用的发挥。miR-150对AdipoR2表达的影响在COPD疾病发生发展中的作用还需要进一步的科学研究来证实。 基于以上研究现状与背景，本研究将通过观察： （1）不同构型脂联素对烟草烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞凋亡及损伤的影响； （2）HMW脂联素及其受体在COPD患者肺组织及血清中表达水平的变化； （3）miR-150在COPD患者肺组织中的表达水平及其与脂联素受体2相关性，探讨脂联素及其受体在COPD疾病进展中的作用，为COPD及其合并症的预防和早期诊断提供新的思路。 目的： 1.研究高等分子量体(HMW)脂联素和球形结构域(gAd)脂联素对烟草烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞（16HBECs）凋亡水平、炎症因子及氧化物质表达的影响。 2.研究COPD患者肺组织及血清中HMW脂联素及其受体的表达水平变化。 3.研究miR-150在COPD患者肺组织中的表达水平变化及其与脂联素受体2的相关性。 方法： 1.16HBECs常规培养后接种于6孔培养板中，随机分为对照组、5％CSE组、HMW脂联素干预组和gAd脂联素干预组。对照组加入培养液；5%CSE组加入5%浓度CSE孵育24h；HMW、gAd干预组分别先以不同浓度的HMW脂联素或gAd脂联素预处理细胞2h，再加入5％CSE培养24h，收集各组别的细胞培养上清液，酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中IL-6、4-HNE水平，用流式细胞仪进行检测细胞凋亡水平及细胞内ROS水平。 2.选取2013年~2015年山西大医院胸外科因肺部病变行肺叶切除术且术后病理学诊断明确的41例患者，男26例，女15例，年龄(61±9)岁。分为肺功能正常组23例，其中病理结果为良性病变患者13例，病理结果为非小细胞肺癌患者10例；COPD组18例，其中病理诊断良性病变者10例，为单纯COPD组，病理诊断非小细胞肺癌患者8例，为COPD合并肺癌组。COPD组患者严格按照COPD诊断标准明确诊断，均为稳定期患者。手术前2周内均无全身或呼吸道感染症状，血白细胞计数、血沉及肝肾功能等均正常。 排除标准： (1)合并肺结核、肺炎、间质性肺疾病、支气管哮喘及支气管扩张等其他肺部疾病，有高血压、糖尿病、冠心病等其他系统疾病及感染性疾病。 (2)各种原因所致的阻塞性肺炎。 (3)慢阻肺患者处于急性加重期。 (4)术前已放疗或化疗。 (5)不愿意配合和完全不能交流的患者。 此项研究已经过学校伦理委员会审核通过。所有研究对象均已签字同意。 3.手术方案由胸外科医生制定并实施，术前记录患者呼吸系统症状、药物治疗史、吸烟史(吸烟指数＝每日吸烟支数×吸烟年数)、CAT评分等临床资料，记录术前1周肺功能、血气分析等检查结果。术前经过整晚禁食后，于早晨采取外周静脉血10ml，分离血清储存于-80℃冰箱中备用。术中远离肺部病灶>5 cm取肺组织，肉眼观察无肺癌浸润的外周新鲜肺组织(2.5 cm×2.0 cm×2.0 cm)，PBS液冲洗血迹后储存于-80℃冰箱中备用。 4.采用 ELISA法检测肺组织匀浆和血清中 HMW脂联素、T-钙黏蛋白（T-cadherin）、IL-6、IL-10、TNF-α、CRP、4-HNE和SP-D的表达水平。 5.采用Western blot法检测肺组织脂联素受体1(AdipoR1）、脂联素受体2（AdipoR2）和T-钙黏蛋白（T-cadherin）的蛋白表达水平。 6.生物信息学预测miR-150的靶基因。 7.采用荧光定量PCR法检测肺组织miR-150的表达水平。 结果： 1.3个不同浓度HMW脂联素干预组IL-6、4-HNE蛋白含量、细胞内ROS水平及细胞早凋率均低于5％CSE组，差异均有统计学意义（P均<0.01）。 2.3个不同浓度gAd脂联素干预组IL-6、4-HNE蛋白含量、细胞内ROS水平及细胞早凋率也均低于5％CSE组，差异均有统计学意义（P均<0.01）。 3.HMW脂联素和gAd脂联素与IL-6、4-HNE蛋白含量、细胞内ROS水平及细胞早凋率呈负相关（P均<0.01）。 4.COPD组HMW脂联素和细胞因子的表达水平 与肺功能正常组相比，COPD组肺组织和血清中HMW脂联素表达水平均增高，差异均有统计学意义（P均<0.05）。 与肺功能正常组相比，COPD组肺组织和血清中IL-6、IL-10、CRP、4-HNE、TNF-α和SP-D均表达增高，差异均有统计学意义（P均<0.05）。 5.COPD组脂联素受体的表达水平 与肺功能正常组相比，COPD组肺组织中AdipoR1表达明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）；AdipoR2表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。 与肺功能正常组相比，COPD组肺组织和血清中T-cadherin表达未见明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）。 6. COPD组HMW脂联素与细胞因子及脂联素受体2之间的相关性分析 COPD组血清中HMW脂联素的表达与IL-6、IL-10、CRP、TNF-α、4-HNE和SP-D均呈正相关（P均<0.05）。 COPD组肺组织HMW脂联素与脂联素受体2的表达水平呈负相关（P<0.05）。 7.COPD组血清中HMW脂联素与患者临床指标之间的相关性分析 COPD组血清中HMW脂联素与肺功能FEV1占预计值的百分比、动脉血氧分压呈负相关，与CAT评分呈正相关（P均<0.05）。 8.COPD合并肺癌组HMW脂联素、细胞因子和脂联素受体的表达 在COPD组内，与单纯COPD组相比，COPD合并肺癌组肺组织和血清中HMW脂联素和IL-6、IL-10、CRP、TNF-α、4-HNE和SP-D的表达均明显升高，差异均有统计学意义（P均<0.01）。 在COPD组内，与单纯COPD组相比，COPD合并肺癌组肺组织中脂联素受体1和T-cadherin的表达均明显升高，脂联素受体2表达明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。 9.生物信息学预测结果 利用多个生物信息学靶基因预测网站分析并预测，发现 miR-150种子序列与AdipoR2的3’UTR序列452-459碱基可完全配对，存在结合位点，并且预测分值>90。 10.两组肺组织miR-150表达水平 双因素方差分析提示肺癌、COPD两因素对miR-150的表达存在明显的交互作用(F=59.61，P<0.01)。进一步行简单效应分析发现，与肺功能正常的非肺癌患者相比，单纯COPD患者 miR-150表达未见明显变化，差异无统计学意义（P>0.05）；与肺功能正常的非小细胞肺癌患者相比，COPD合并非小细胞肺癌患者miR-150表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。 11.COPD组肺组织miR-150表达水平及其与AdipoR2表达之间的相关性 在COPD组内，与单纯COPD组相比，COPD合并肺癌组肺组织miR-150表达水平明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。 在COPD组内，单纯COPD组肺组织miR-150与AdipoR2的表达水平无相关性（P>0.05）；COPD合并肺癌组中，肺组织miR-150与AdipoR2的表达水平呈明显负相关（P<0.05）。 结论： 1.HMW脂联素及gAd脂联素可以降低烟草烟雾提取物对人支气管上皮细胞的凋亡及损伤作用，其可能成为COPD新的治疗靶点。 2.HMW脂联素和多种细胞因子共同参与了COPD的病理生理过程，并且与患者的肺功能、低氧血症和临床症状评分密切相关。 3.作为HMW脂联素的受体，AdipoR2的表达下调影响了其保护性的抗炎作用，从而可能促进了在COPD的疾病进展 4.作为HMW脂联素特异性的受体，T-cadherin可能并未参与COPD的炎症反应和氧化应激机制中。T-cadherin的表达上调可能参与了COPD合并非小细胞肺癌的病理生理过程。 5.脂联素受体表达的变化可能成为COPD合并非小细胞肺癌的生物学预测指标。 6.miR-150在COPD患者中表达未见明显变化，可能并未参与其疾病的进展过程。 7.miR-150在COPD合并非小细胞肺癌患者中表达上调，可能作为COPD患者合并肺癌的诊断标志物， 8.miR-150可能通过下调其靶基因AdipoR2的表达，从而影响HMW脂联素抗炎、抗肿瘤保护性作用的发挥，进而参与COPD合并非小细胞肺癌的发生发展。