辣椒（Capsicum annuum L.）原产南美洲,为茄科辣椒属草本植物。目前在我国,辣椒产业的种植面积高达3200多万亩,是我国主要的经济果蔬品种及加工调味品。尽管利用传统育种方法已经培育出许多辣椒优良品种,但由于辣椒基因组庞大,且辣椒材料难以进行遗传转化,因此目前辣椒的基础研究较为薄弱,导致世界范围内的辣椒分子育种进展缓慢。辣椒种植过程中目前存在着许多病害问题,严重制约了辣椒产业的健康发展。其中,辣椒炭疽病危害严重,流行范围广、速度快,且危害时间长,可造成大面积减产减收,是目前限制辣椒高产的主要病害之一。然而,传统炭疽病防治方法效果一般且不具有可持续性,通过筛选并培育抗病辣椒资源是在农业生产上防治辣椒炭疽病的有效途径。在本课题研究过程中,我们首先从田间获得自然发生炭疽病的‘HP’品种辣椒果实,从中分离并鉴定了导致辣椒发生炭疽病的病原菌Colletotrichum scovillei。随后,利用本课题组前期经过EMS诱变获得的‘HP’品种辣椒突变体群体,对M1代219个突变体株系进行了离体果实抗炭疽病筛选;为了缩短筛选时期,我们建立了简捷高效的辣椒苗期炭疽病筛选体系,并利用该套体系对突变株系M2代单株进行了苗期炭疽病抗性筛选;最后通过继续对M2代果实进行炭疽菌接种与抗性筛选,以期获得对炭疽菌具有稳定抗性的辣椒突变体单株,为本课题组后续进行抗性基因定位及开发分子标记打下良好基础。具体研究结果如下:1.通过在田间采集辣椒‘HP’品种自然发病果实,共分离培养出60个病原菌;对分离物进行形态学观察,并进行ITS参考基因序列比对,初步判断其中44个为疑似炭疽属病原菌;从上述44株菌株中随机选择了13个菌株对3种辣椒果实进行致病力回接,发现这13个菌株全都可以使辣椒致病,但病情指数各不相同;继续从中选取6个导致不同病情指数的菌株作为代表菌株,与强致病力菌株CD一起进行形态特征详细观察,包括菌落生长速度、菌落正反面颜色、分生孢子以及附着胞的形态大小等,初步确认这6个病原菌与CD一致,均为C.scovillei炭疽菌;最终通过对多个Colletotrichum内参基因联合聚类分析,并构建系统发育树,再次确定上述6株炭疽菌与CD一致,分类地位均为C.scovillei。2.通过建立辣椒‘HP’品种野生型果实离体炭疽病抗病性筛选标准,我们对‘HP’突变体M1代219个株系进行了果实炭疽病抗性筛选,分别在青果和黄果中筛选到数个抗病和感病突变体株系,统计二者中抗性一致的突变体,分别获得5个在青果与黄果中均抗病的株系,以及5个在青果与黄果均感病的株系。3.为了缩短突变体筛选周期,克服果实接种限制,我们首先尝试了2个辣椒苗期接种方法:注射法与针刺法。采用5个接种浓度:1×103、1×104、1×105、1×106和3×106个/ml;接种4个时期辣椒苗:子叶期、1-2片真叶期、3-4片真叶期和5-10片真叶期进行发病观察;最终建立辣椒‘HP’苗期接种体系:利用针刺法在3-4真叶期接种浓度为1×106个/ml的孢子悬浮液时发病率为100%,病斑近圆形,可用于发病面积定量统计。4.利用上述接种体系,我们继续建立了辣椒‘HP’品种野生型苗期炭疽病抗病性筛选标准;针对上述在M1代离体果实筛选得到的10个突变体株系,分别对其M2代单株进行苗期抗性筛选;得到8个与M1代抗性一致的株系,其中4个株系持续感病,4个株系持续抗病;继续从这8个株系中各选取15株极端抗性植株,去除发病叶后进行田间定植,后续对其进行M2代果实抗性筛选;最终获得3株具有一致稳定抗性的株系,分别为较抗株系H630、H662与较感株系H204。