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尿激酶(Urokinase)是体内纤溶酶原激活剂.自从在尿液中发现尿激酶以来,人们对它的研究也日益深入和全面.尿激酶参与纤溶过程,因而常用作治疗脑血栓、急性心肌梗塞和静脉栓塞等疾病.尿激酶是一种糖蛋白,属丝氨酸蛋白酶类,等电点在8.4~9.7之间.尿激酶的活性检测方法主要有直接法与间接法,采用间接法较为快捷,如荧光分光光度法和可见光分光光度法是使用较广泛的测定方法.高纯度的药用尿激酶价格昂贵.通常是从成年健康男性尿液中提取,制得粗酶后早期采用沉淀和传统层析相结合的多步分离法,后来发展用亲和层析纯化尿激酶.该文采用Sepharose 4B为基质,对氨基苯甲脒(p-aminobenzamidine,p-ABZ)和肌酸为亲和配基,制备亲和层析柱分离尿激酶.在前人的研究工作基础上,该文选择对氨基苯甲脒层析柱在最优的条件下分离尿激酶:合成配基密度48μmol·g<-1>的亲和载体,最大吸附量达2.17×10<5>IU·g<-1>载体以上;选择pH7.5含0.5mol·L<-1>NaCl的0.05mol·L<-1> Na<,2>HPO<,4>~NaH<,2>PO<,4>缓冲液为吸附条件,选择pH4.0含0.5mol·L<-1> NaCl的0.1mol·L<-1>NaAc~HAc缓冲液洗脱条件;将尿激酶粗酶纯化50.2倍,活性回收率为79﹪.首次将肌酸应用于分离尿激酶,并取得较好的效果,合成配基为53μmol·g<-1>的亲和载体,最大吸附量为1.28×10<5>IU·g<-1>载体;选择pH4.5含0.5mol·L<-1>NaAc,0.1mol·L<-1> AlCl<,3>的0.1mol·L<-1>NaAc~HAc缓冲液为吸附条件,选择pH7.0含0.5mol·L<-1>NaCl的0.05mol·L<-1>Na<,2>HPO<,4>~NaH<,2>PO<,4>缓冲液为最终洗脱条件;将尿激酶粗酶纯化63.7倍,活性回收率为81﹪.将两种亲和层析柱进行比较,发现Sepharose 4B~6-氨基己酰~对氨基苯甲脒吸附容量大,分离条件简单.而Sepharose 4B~1,6-己二胺~N-脒基肌氨酰因在分离体系中引入Al<3+>,分离条件稍复杂,吸附容量相对较小,但是配基价格相对低廉,可望降低分离成本、产生显著的经济效益,有较好的应用前景,值得进一步深入研究.此外,对氨基苯甲脒亲和层析柱进行动力学原理的分析,探讨生产放大的理论依据.