煤沥青碳量子点与氨基磁性纳米复合材料的制备及荧光免疫分析体系的构建

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磁性纳米复合材料因其尺寸效应而表现出优异的超顺磁性,在外部磁场的影响下,可以实现快速地分离。通过对磁性纳米复合材料的氨基修饰,可以通过化学吸附连接蛋白质,从而达到富集和快速分离蛋白质的目的,这种性质使磁性纳米复合材料代替传统免疫分析方法中的固相载体,可以减少操作的复杂性,缩短检测时间,降低检测成本。本文的工作中分别制备了一种碳量子点和两种氨基化磁性纳米复合材料。以碳量子点为荧光标记物,两种氨基化磁性纳米复合材料为负载抗体的固相载体,利用竞争免疫反应原理,构建了两种荧光免疫分析体系。(1)通过自上而下法,煤沥青为碳源合成了煤沥青碳量子点,采用傅里叶红外光谱、X射线光电子能谱以及紫外光谱证明了煤沥青碳量子点的成功合成。采用透射电镜观察到煤沥青碳量子点的微观结构。通过荧光光谱证实了煤沥青碳量子点的荧光性能,其最佳激发波长和最佳发射波长分别为320nm和445nm。(2)制备了Fe3O4@SiO2-NH2磁性纳米复合材料并建立对应荧光免疫分析体系。先后采用化学沉淀法和溶胶-凝胶法制备了Fe3O4纳米颗粒和Fe3O4@SiO2核壳材料,以硅烷偶联剂3-氨丙基三乙氧基硅烷对Fe3O4@SiO2进行表面修饰,得到氨基化磁性纳米复合材料Fe3O4@SiO2-NH2。通过傅里叶红外光谱和X射线衍射证明了磁性纳米复合材料Fe3O4@SiO2-NH2的成功合成。采用透射电镜观察到Fe3O4纳米颗粒、Fe3O4@SiO2核壳材料和Fe3O4@SiO2-NH2磁性纳米复合材料的微观结构,它们的粒径分布相对集中,并且随着硅层的包覆和氨基化修饰的完成,磁性纳米材料的粒径逐渐增大,同时磁性能表征显示它们的饱和磁化强度逐渐减小,三者饱和磁化强度顺序为Fe3O4(94.04 emu·g-1)>Fe3O4@SiO2(57.99emu·g-1)>Fe3O4@SiO2-NH2(55.72 emu·g-1),Fe3O4@SiO2-NH2磁性纳米复合材料满足免疫分析体系构建对材料磁性能的需要。优化了Fe3O4@SiO2-NH2磁性纳米复合材料的蛋白质吸附条件和制备条件,使其具有较好的蛋白质吸附性能。分别制备了碳量子点和目标抗原的偶联物、Fe3O4@SiO2-NH2和抗体的偶联物,构建了对应的荧光免疫分析体系,回收率在100.1~105.6%之间,相对标准偏差在2.53~3.80%之间,具有良好的精密度与准确性,并对大部分金属离子具备抗干扰性。(3)制备了Fe3O4@SiO2@PEI磁性纳米复合材料并建立对应荧光免疫分析体系。通过静电自组装反应,使用聚乙烯亚胺高分子聚合物在Fe3O4@SiO2核壳材料表面进行氨基修饰,制备得到Fe3O4@SiO2@PEI。通过傅里叶红外光谱、X射线衍射和Zeta电位证明了磁性纳米复合材料Fe3O4@SiO2@PEI的成功合成。采用透射电镜观察到Fe3O4@SiO2@PEI的微观结构,其粒径远大于Fe3O4、Fe3O4@SiO2和Fe3O4@SiO2-NH2。磁性能表征显示其饱和磁化强度最小,为50.78emu·g-1,满足了免疫分析体系对材料磁性能的需要。优化Fe3O4@SiO2@PEI磁性纳米复合材料的蛋白质吸附条件和制备条件,其蛋白质吸附能力高于Fe3O4@SiO2-NH2。最后构建了以Fe3O4@SiO2@PEI为固相载体的免疫荧光免疫分析体系,回收率在99.5~103.1%之间,相对标准偏差在2.92~4.45%之间,具有良好的精密度与准确性,并对大部分金属离子具备抗干扰性。
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