【摘 要】
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近年来,对真菌资源的利用涉及到人类生活的方方面面,越来越多的真菌被发现并用于科学研究。来源于真菌的天然产物具有多种生理功能。白腐真菌桦褐孔菌是一种天然药食用真菌,
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近年来,对真菌资源的利用涉及到人类生活的方方面面,越来越多的真菌被发现并用于科学研究。来源于真菌的天然产物具有多种生理功能。白腐真菌桦褐孔菌是一种天然药食用真菌,在中国、俄罗斯及波罗的海等国家被作为一种民间药材使用,桦褐孔菌含有丰富的生物活性化合物,其多种生物活性功能如抑菌活性已被证实,但桦褐孔菌天然资源稀缺,液体深层发酵是获取其活性成分的重要方法。本论文在生物活性的指导下,通过添加木质纤维素作为底物的液体发酵、有机溶剂液液萃取以及色谱柱分离,发现液体发酵桦褐孔菌乙酸乙酯萃取物的D101大孔吸附树脂柱分离第1段(D101-Fr.1)具有最强的抑制金黄色葡萄球菌ATCC6538(革兰氏阳性菌)活性,同时,发现乙酸乙酯萃取物的硅胶柱色谱第1分段物(SG-Fr.1)具有最强的抑制大肠杆菌(革兰氏阴性菌)活性,而且这些抑菌成分和氨苄青霉素相比,对所试菌种抑制作用的时效性更长。为进一步研究桦褐孔菌抗菌活性和应用奠定了物质基础。本论文研究桦褐孔菌液体发酵胞外液、有机溶剂(乙酸乙酯、正丁醇、水层)萃取液以及柱色谱(大孔吸附树脂、硅胶吸附色谱)分段洗脱液的抑菌活性,以标准菌株大肠杆菌(ATCC 8099)、枯草芽孢杆菌(ATCC 6051)、粪肠球菌(ATCC29212)、肺炎链球菌(ATCC 49619)和金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)为实验对象,通过测定其抑菌圈直径IZD、最小抑菌浓度MIC、杀菌浓度MBC以及生物膜(BF)抑制率得到以下主要结果和结论:所有分离组分中,乙酸乙酯萃取液D101-Fr.1对于金葡球菌ATCC 6538的抑菌效果最好:在200mg/m L的质量浓度下的IZD(mm)为18.67±2.52,MIC和MBC分别为0.39,0.78 mg/m L。生物膜抑制实验中,D101-Fr.1在2 MIC(即0.78 mg/m L)的浓度下对金葡球菌ATCC 6538的贴壁抑制率达到最大65%,随着浓度的升高其抑制作用有所下降;D101-Fr.1在1/2MIC浓度下(0.20 mg/m L)下对于金葡球菌ATCC 6538已形成生物膜的破坏率最强为67%,该浓度明显低于最佳贴壁生长抑制浓度,说明低浓度的D101-Fr.1对于金葡球菌ATCC 6538的已形成生物膜的破坏作用强于贴壁生长抑制作用。所有分离组分中,乙酸乙酯萃取液SG-Fr.1对大肠杆菌ATCC 8099抑制作用最强,在200 mg/m L的质量浓度下IZD为17.00±1.4 1,其MIC和MBC分别为0.39和0.78 mg/m L。生物膜抑制实验中,SG-Fr.1在0.39 mg/m L,即MIC的浓度下对于大肠杆菌ATCC 8099的生物膜贴壁生长抑制率达到最大为59%,随着SG-Fr.1浓度的增加其抑制作用不再提高,SG-Fr.1对大肠杆菌ATCC 8099的已形成生物膜的破坏作用较弱,破坏率在0.3%-9.0%之间。推测,SG-Fr.1对大肠杆菌ATCC 8099的抑制作用主要是通过抑制其贴壁生长来实现。和氨苄青霉素相比,以上所有来源于桦褐孔菌深层发酵组分对所试菌种抑制作用具有更长的时效性。根据乙酸乙酯萃取物D101-Fr.1与硅胶柱色谱进一步分离组分D101-Fr.1-1的HPLC结果推测,D101-Fr.1中可能存在化合物之间的协同效应。
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