酸枣中多酚和黄酮类化合物的时空分布及其生物活性

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作为我国最古老的树种之一,酸枣树(Ziziphus.acidojujuba Cheng et Liu)属于多用途果树,不仅可以防固风沙,其果实和种仁还是重要的药食同源的食品,主要栽培区有河北、河南、陕西、辽宁等地。酸枣富含各种营养物质,如维生素、矿物质、多酚和黄酮等,但关于酸枣的成分研究和加工利用都主要集中在酸枣果肉和种仁这两个部位,其余部位鲜有涉猎。因此本文对酸枣树不同部位的多酚和黄酮类物质进行比较,探究其最佳部位的多酚和黄酮的动态变化,同时对黄酮的提取工艺进行优化,并对其进行富集纯化和定性定量测定,旨在深入开展酸枣树活性成分的研究,为酸枣资源的综合利用和多元化开发提供一定的理论支持。研究结果如下:(1)提取原料的筛选选取酸枣树枝、叶、花、果肉和种仁这五个不同的组织部位为原料,分别测定其总酚和黄酮类物质的含量,并检测其体外抗氧化活性,发现酸枣叶所含酚类和黄酮类物质最多(分别为20.38 mg/g和20.49 mg/g)且抗氧化最好,故而选择酸枣叶作为后续试验材料。对酸枣叶多酚和黄酮及对DPPH·清除能力的动态变化进行测定,发现其随着时间的变化产生明显的波动性变化。(2)酸枣叶黄酮提取工艺的优化对选取的最佳采摘期的原料用超声辅助提取法进行萃取其中黄酮类物质,在对单因素试验中的超声时长、甲醇浓度含量和料液配比三要素考虑的基础上,通过响应面耦合遗传算法的方式对提取工艺进行进一步的优化,在考虑到实际生产后最终优化结果为:酸枣叶黄酮提取含量最多为41.80 mg/g,此时工艺提取参数为提取时间45 min、甲醇体积分数86%、料液比例为1:25(g/mL)。(3)酸枣叶粗提物的纯化及成分分析利用最佳提取工艺对酸枣叶中黄酮进行提取后,用三种有机溶剂(正己烷、乙酸乙酯和正丁醇)对酸枣叶粗提物分批萃取后发现乙酸乙酯相中所含酚类和黄酮的量最高(分别为184.5 mg/g和193.3 mg/g),且抗氧化活性最好。随后针对乙酸乙酯相进行分析,用LC-MS技术进行成分鉴定,共鉴定出31种常见的酚类物质,其中黄酮有21种。后利用高效液相色谱技术对乙酸乙酯相中的表没食儿茶素、儿茶素、绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷和柚皮素进行定量分析的结果表明儿茶素含量最高为33.00 μg/mg,其次为表没食儿茶素和柚皮素。(4)酸枣叶多酚和黄酮化合物的富集及活性测定对乙酸乙酯相提取物用大孔树脂进行纯化,50%乙醇洗脱馏分提取物中的多酚和黄酮含量最高且抗氧化效果最好,并且比原乙酸乙酯相中的黄酮含量高,实现了酸枣叶黄酮的有效富集。后续以50%乙醇洗脱馏分为试验材料测定其体外抗菌活性,结果表明酸枣叶黄酮具有良好的广谱抗菌性,对大肠杆菌、金黄葡萄球菌和枯草芽孢杆菌以及白色念珠菌分别展现出不同的抑制效果,其中以对金黄葡萄球菌的抑制效果最好,其MIC为2.5mg/mL,MBC为5mg/mL。
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