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酰胺酶（EC3.5.1.4）是一类能够催化水解酰胺键生成相应氨基和羧基的水解酶，在工业上主要应用于丙烯酸、烟酸等重要化工原料的生产。近几年发现来源于Nocardiafarcinica的聚酰胺酶能够催化水解锦纶（polyamide，PA），在PA表面改性方面具有潜在应用价值。但是目前野生菌酰胺酶产量很低，发酵周期长，无法实现工业化应用，因此通过基因工程手段，提高聚酰胺酶的产量，是实现聚酰胺酶工业化生产和应用的必由之路。本研究主要对诺卡氏菌N.farcinicaCGMCC4.1166的聚酰胺酶基因进行克隆表达，并对重组酶进行分离纯化及酶学定性；对重组聚酰胺酶应用于PA表面改性的效果进行了深入研究；进一步研究聚酰胺酶的空间结构，初步探究了聚酰胺酶能够水解PA的原因。主要研究结果如下：（1）确定N.farcinica CGMCC4.1166来源的聚酰胺酶对PA的表面改性效果。与磷酸缓冲液、Cnamidase相比，聚酰胺酶和处理后PA的吸水高度和上染率有明显提高，因此初步确定来源于N.farcinica CGMCC4.1166的聚酰胺酶能够水解PA。（2）为了进一步提高聚酰胺酶的产量，构建了重组菌pT7-7-AMID-BL21（DE3），成功实现了聚酰胺酶在E.coliBL21（DE3）中的可溶性表达。重组菌每毫升发酵液菌体破壁上清平均酶活约为0.6U，为野生酶酶活的30倍。（3）对重组聚酰胺酶进行分离纯化和酶学性质分析。结果表明重组聚酰胺酶的最适温度为50°C，最适pH为8.0，不需要金属离子激活；聚酰胺酶为嗜温性水解酶，在30°C、40°C下具有较好的稳定性，其半衰期分别为140h和60h；40°C以上聚酰胺酶的稳定性较差，其中50°C下的半衰期仅为1.5h；重组酶可水解的底物范围比较广，对芳酰基和脂肪族酰胺类底物具有较高的酶活，但无法水解己内酰胺和丙烯酰胺；以己酰胺为底物，30°C，pH7.0，重组聚酰胺酶的Km值为1.82mM，Vmax为4.5U/mg，Kcat为9.23s-1。（4）考察了重组聚酰胺酶对PA的改性效果。与磷酸缓冲液、突变酶和Cnamidase相比，重组酰胺酶处理后PA的吸水高度分别提高了6.5cm、4.8cm、4.1cm，上染率分别提高了20.8%、10.1%和12.5%，基本能够达到碱处理效果。HPLC检测得到重组聚酰胺酶的处理液中存在PA纤维单体己二酸，说明了聚酰胺酶确实能够水解PA纤维结构中的酰胺键，提高PA纤维的性能。通过优化温度、pH、处理时间和摇床转速等因素对酶处理的影响，确定了酶处理的最优条件为：40°C，pH7.5，处理时间1h，摇床转速100rpm。（5）从空间结构上初步分析了聚酰胺酶能够水解PA的分子机制。推测酰胺酶区域A和区域B是影响底物特异性的关键，聚酰胺酶与底物结合过程中酶分子受到底物的诱导作用导致区域A和区域B构象改变，活性中心暴露而完成催化过程。