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目的:前期研究发现,miR-21反义寡核苷酸(AS-miR-21)能显著抑制AP1和eNOS蛋白表达,转录因子AP1在AS-miR-21对eNOS的表达调节中起重要作用。进一步研究anti-miR-21对AngⅡ刺激下内皮型一氧化氮合酶基因表达调节的分子机制及其对体外血管形成的影响。1研究anti-miR-21对AngⅡ刺激下内皮型一氧化氮合酶基因表达调节的分子机制;2探讨anti-miR-21抑制AngⅡ刺激下内皮细胞增殖、迁移的机制及其对体外血管形成的影响;3阐明内皮细胞增殖、迁移和血管形成的分子机制,深入探讨anti-miR-21在心血管系统发育和心血管疾病中的作用。方法:1检测anti-miR-21对AngⅡ刺激人脐静脉内皮细胞eNOS和Ap1表达的影响构建anti-miR-21高表达质粒,通过X-treme GENE HP DNA转染试剂将anti-miR-21质粒转染入人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内,根据实验目的将HUVECs分为3组:对照组、AngⅡ组和anti-miR-21+AngⅡ组。采用硝酸还原酶法检测细胞上清液的NO浓度;RT-PCR法分别检测eNOS和AP1 mRNA表达水平、免疫组化和免疫印迹实验(Western blotting)分别检测eNOS和AP1蛋白表达情况。2检测anti-miR-21对AngⅡ刺激下人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和血管形成的影响构建anti-miR-21高表达质粒,通过X-treme GENE HP DNA转染试剂将anti-miR-21质粒转染入人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内,根据实验目的将HUVECs分为3组:对照组、AngⅡ组和anti-miR-21+AngⅡ组。观测HUVECs的增殖(四甲基偶氮唑盐,MTT法)、迁移(细胞划痕实验)、凋亡(流式细胞术)和血管形成(人工基底膜,Matrigel法)等生物学行为的改变。3检测anti-miR-21对AngⅡ刺激下人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和血管形成的分子机制构建anti-miR-21高表达质粒,通过X-treme GENE HP DNA转染试剂将anti-miR-21质粒转染入人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内,根据实验目的将HUVECs分为3组:对照组、AngⅡ组和anti-miR-21+AngⅡ组。采用PCR法检测经AngⅡ刺激后miR-21的表达情况;采用免疫印迹实验分别检测CD31和VEGFR2蛋白表达情况。结果:1与对照组比较,AngⅡ组HUVECs的AP1与eNOS mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),而转染anti-miR-21对其mRNA和蛋白表达都起到抑制作用(P<0.05)。2与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖明显上升(P<0.05),迁移数目上升(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05),形成管腔能力增强,而转染anti-miR-21均可对上述生物学行为起到抑制作用。3与对照组比较,Ang II刺激6h组和刺激24h组的miR-21 mRNA表达量均升高(P<0.01),但随着刺激时间的增长,miR-21 mRNA表达量有所下降(P<0.01);AngⅡ组HUVECs的CD31与VEGFR2蛋白表达均增加(P<0.05),而转染anti-miR-21对其蛋白表达都起到抑制作用(P<0.05)。结论:1 Anti-miR-21明显抑制AngⅡ刺激下HUVECs eNOS的表达;转录因子AP1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。2 Anti-miR-21明显抑制AngⅡ刺激下HUVECs的增殖、迁移、凋亡和血管形成能力,并且与其调控eNOS的表达有关。3 miR-21可能作为一个重要因子参与Ang II对内皮细胞血管生成的调节。