【摘 要】
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本文利用生物信息学工具DGED搜索CGAP中1个胃癌和32个正常组织的SAGE数据库,27个胃癌和229个正常组织的表达序列标签EST数据库,比较胃癌与正常组织的基因表达差异,获得了296
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本文利用生物信息学工具DGED搜索CGAP中1个胃癌和32个正常组织的SAGE数据库,27个胃癌和229个正常组织的表达序列标签EST数据库,比较胃癌与正常组织的基因表达差异,获得了296个胃癌上调基因.根据功能可大致分为结构蛋白、转录因子、细胞周期分子、血管生成因子、细胞增殖因子、免疫因子、未知功能基因,其中24个基因已经有文献报道在胃癌中高水平表达.此外,基于同样的方法,还分别比较了4个胃癌和2个正常胃组织SAGE文库、28个胃癌和6个正常胃组织EST文库中转录子的差异,共获得108个胃癌下调基因,其中11个基因有研究表明在胃癌中的表达低于正常胃组织.我们首次对MMP11和S100A6基因在胃癌中的变化进行了系统分析,利用RT-PCR和基于组织微阵列的免疫组织化学技术确定了MMP11(55/100,55﹪)和S100A6(45/100,45﹪)基因在胃癌组织中过量表达.此外,实验观察到MMP11不仅表达于胃癌细胞,还存在癌旁纤维母细胞旁分泌现象,而且在紧邻肿瘤组织的形态学正常胃粘膜、肠上皮化生及腺颈部细胞也表达MMP11蛋白,这一结果提示MMP11基因可能参与胃粘膜病变细胞的演化和癌变.MMP11基因在肿瘤组织中过量表达,但意义尚不清楚,本文利用RNA干涉技术对其功能进行了初步的研究.通过构建能形成发夹结构的siRNA质粒,采用脂质体方法转染BGC823细胞并经G418筛选,获得稳定表达siRNA的细胞和克隆,RT-PCR和Western-b1ot证实MMP11基因的mRNA和蛋白表达受到特异性的抑制.MMP11表达下调的BGC823多核细胞的数目增加、细胞生长受到抑制、软琼脂集落形成能力下降,表明MMP11可能参与细胞增殖的调控.本课题以MMP11基因为靶点,建立基于数据库挖掘、高通量组织微阵列以及RNAi技术整合的研究体系,为充分利用生物信息和医药资源,鉴定肿瘤分子标志和阐明肿瘤分子机理提供了一个有效途径.
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