论文部分内容阅读
KCNE1，为电压依赖性钾离子通道KCNE1/KCNQ1(亦称IKs通道)的调节亚基，该通道介导心肌细胞动作电位中的复极化IKs电流。而KCNE1对于该通道独特的慢激活特征的维持是不可替代的。据文献报道KCNE1的胞内片段(C-端)在调控IKs通道动力学特征上起主要作用，但具体的部位并不十分清楚。另据文献报道kcnel基因的突变可致临床上具有很高致死率的心率不齐疾病心脏长QT综合征的五型(LQT5)。
近年来有研究发现多态性位点(single nucleotide polymorphism，SNP)也具有潜在的致病性，但与LQTS的关系尚不十分明确。基因库的资料表明，人源kcnel存在一个SNP位点318C/A(氨基酸：106C/Ter)，318A造成终止密码子提前出现，导致KCNE1胞内C-末端24个氨基酸的缺失(末端缺失片段称C24，末端缺失C24的突变体称KCNE1-△24)。通过基因同源性比对进一步发现，C24在不同种系的KCNE1间有很高的同源性，但在不同种系KCNE家族成员(KCNE1-5)间的同源性却很低，提示C24片段与KCNE1的独特功能有关。因此，本文拟通过建立突变体KCNE1-△24，研究该突变体与KCNQ1之间的相互作用，分析该突变体的功能。
利用分子克隆和点突变技术构建了野生型的KCNE1和突变体KCNE1-△24，并在HEK293及CHO细胞系中进行瞬时表达。蛋白免疫印迹、细胞免疫染色和免疫共沉淀的结果表明，该突变体在细胞系中的表达、亚细胞定位与野生型KCNE1无明显差异，说明C24片段缺失不影响其表达、亚细胞定位及与KCNQ1的装配。全细胞膜片钳记录数据表明，该突变体与野生型KCNQ1所形成的通道呈现电压依赖性曲线右移及通道激活速率变慢，而通道的电流密度无显著性变化。
本文的数据提示，末端缺失C24片段的突变体KCNE1-△24可与野生型KCNQ1形成功能性通道；该突变通道在生物物理学特征上明显不同于野生型的通道，表现为通道的开放时程变慢及开放所需的激活电压变正。由此我们推测，SNP位点318C/A导致的C24片段缺失的KCNE1突变体可能会因延长心肌细胞复极化过程而致Q-T间期延长。目前尚未见该突变体所致KCNE1/KCNQ1通道功能异常及临床上相关LQT5病例的报道。我们将在原代培养的心肌细胞中，对该突变体的潜在致病性作进一步的研究。