山羊卵母细胞显微受精(ICSI)及早期胚胎体外培养的研究

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本文主要对影响山羊卵母细胞显微受精(ICSI)和早期胚胎在体外培养条件下发育效果进行系统的研究,具体结果如下: 由体外成熟和超数排卵两种途径获得的MⅡ期成熟卵母细胞,经过ICSI后,2-细胞、4-细胞和8-细胞卵裂率分别是34.8%和34.6%、21.7%和19.2%、12.5%和15.4%。两种途径获得的卵母细胞ICSI后的卵裂率没有显著性差异。 ICSI过程中,经过细胞松弛素B(CB)处理过的卵母细胞的卵裂率(34.7%)和对照组相比差异极显著。 在精子基因共注射的实验中,精子基因共注射组的2-细胞是18.5%,显著低于对照组37.1%的卵裂率,但是二者在4-细胞和8-细胞的卵裂率没有显著性差异。 精子注射组和对照组(假注射)相比,实验组的激活率(34.7%)要显著高于对照组(0%)。 体外发育液中添加输卵管液的浓度分别为0%(Ⅰ)、20%(Ⅱ)、50%(Ⅲ)和100%(Ⅳ)。第Ⅱ组在2-细胞、4-细胞和8-细胞卵裂率分别为83.3%、69.0%和47.6%与对照组没有显著差异。但是显著高于第Ⅲ组(47.6%、28.5%和14.3%)和第Ⅳ组(52.6%、26.3%和15.7%)。当胚胎发育到16—细胞和桑椹胚时,第Ⅱ组(28.5%和26.1%)显著高于第Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组,后三组则没有显著性差异。 注射外源基因的胚胎分别培养在输卵管液的浓度分别为0%(对照组)、20%和50%的培养液中。在含20%输卵管液组中,胚胎在2-细胞、4-细胞和8-细胞卵裂率在分别是80.0%、47.5%和32.5%,和对照组没有显著性差异,均高于含50%输卵管液组。当发育16一细胞时,20%输卵管液组的发育率(20.0%)显著高于对照组(6.7%)和50%输卵管液组(4.8%)。 转基因克隆胚在体外20%输卵管液和体内培养相比,在2一细胞、4一细胞、8一细胞、4 1.5%和16一细胞和桑堪胚的卵裂率分别是68.3%和72.2%、51.2%和58.2%、44.4%、22.0%和25.0%、胚的发育率略高于体外培养组, 7.3%和11,1%。虽然体内培养的转基因克隆但是均没有显著性差异。 当转基因胚胎在输卵管上皮细胞系统内共培养时,2一细胞和4一细胞卵裂率分别是87.5%、58.3%,和对照组的86.7%、53.3%无显著性差异;在8一细胞和16一细胞的发育率分别是58.3%、37.5,显著高于对照组的26.7%和6 .7%。
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