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目前抗骨质疏松药物主要是骨吸收抑制剂，它们升高骨量的作用十分有限。甲状旁腺激素（PTH）及其某些片段已被认为是最有前途的促成骨药之一。以往该方面的动物实验大多是用3月龄甚至更年幼的大鼠为实验对象，为了探讨间歇性注射PTH对壮年大鼠去卵巢后较长时间（类似于妇女绝经后较长时间）的促成骨作用及其在细胞和分子水平的作用机理，我们完成了以下研究。 一、间歇性注射重组人甲状旁腺激素（1—84）(rhPTH1-84)对去卵巢大鼠骨矿密度（BMD）和骨组织形态计量学的影响 将6月龄雌性未育SD大鼠随机分成5组：①去卵巢终点组（OVXE组，n=6），②去卵巢+PTH注射组（OVXE+PTH组，n=6），③假手术终点组（ShamE组，n=6），④假手术基础组（Sham B组，n=5），⑤去卵巢基础组，（OVXB组，n=6）。其中①、②和③组均在术前、术后3和4.5个月时用双能X线骨密度仪（DEXA）测腰椎和右股骨上端BMD，在术后3～4.5个月期间，给②组大鼠每日皮下注射1次rhPTH1-84（20μg/100g体重，6次/周），①和③组大鼠，则注射PTH溶媒（含0.001％乙酸的PBS）；①、②和③组在术后4.5个月，④和⑤组于术后3个月处死取右胫骨上端做骨组织形态计量学分析，所有动物处死前第6和第2天均在腹腔内注射Calcein。结果显示：①OVXE组大鼠在术后3和4.5月时腰椎BMD与术前比无明显变化（P均＞0.05），OVXB组胫骨上端骨小梁面积百分数（％TbAr）比Sham B组下降了52％（P＜0.001），其表示成骨功能的动态指标标记周长百分数（％LPm）、矿化沉积率（MAR） 南京医科大学博士学位论文和表示破骨功能的骨。J、梁表面破骨细胞数（NOfOC）均明显高于同龄的 Sham B组(P＜0．05和 0．01入②PTH／PBS注射期间 OVX＋PTH组腰椎 BMD上升了 15．7士9．sing／。mvX士SD人与 Sham E组相似(PIno．05人而 OVXE组下降了 13．8士8．sing／Cm＼OVXE＋PTH组与 OVXE组 BMD变化值差别显著（P＜0．01），这三组股骨上端BMD均上升且上升幅度相似(P＞0．05入③骨组织形态计量学分析显示：在治疗终卢、OVXE十 PTH组％TbAr明显高于OVXE组（P t 0．0 5），与 OVXB组相近（P ＞ 0．0 5），其骨小梁厚度（TbTh）明显高于其他 4组o均＜0．05X骨小梁数目（TbN）略多于 OVXE组但差异不显著(0．05riP＜0．1入其％LPm、MAR和骨形成速率（BFR／BV）均明显高于 OVXE和 Sham E组(P＜0．01和0．001人N of Oc N。I与 OVXE b Sham E lA无明显差别（P＞0．05人这些结果表明：①6月龄 SD大鼠在去卵巢后腰椎 BMD的变化不如腴骨上端骨小梁面积变化敏感，去卵巢对大鼠皮质骨BMD无明显影响，大鼠去卵巢后3个月内成骨与破骨活动均增强。②rhPTH；、s硝明显提高去卵巢大鼠腰椎BMD，能维持其股骨上端骨小梁面积不下降，但对股骨上端 BMD无明显影响，③间歇性注射PTH能促进成骨活动增强而对破骨活动无明显影响，虽对骨小梁数目有轻度增多作用，但主要是通过促进骨小梁增厚而提高骨量。 二fTH对体外培养的大鼠成骨细胞增遁及功能的影响 我们按PTH给大鼠注射后的药代动力学设计了大鼠成骨细胞（OB）培养方案，即在 48h／循环培养周期中对照组细胞在前 6h和后 42h均在含 PTH溶媒的培养基中培养，PTH间歇刺激组O 刺组）细胞于前 6h在含 PTH。－。。而后 4 Zh在含 PTH溶媒的培养基中培养，PTH持续刺激组（持刺组）细胞在前 6h和后 4 Zh均在含PTH；－。J的培养基中培养，各组细胞均在第 6h fa 48h换液。OB中 1型胶原(a＊链 mRNA含量用逆转录－多聚酶链式反应（RT－PCR）测定，无血清培养基中 1型原胶原梭基端前肽（PICP）采用放射免疫法测定，钙结节数目用 Von Kossa染色显示，细胞层总钙用原子吸收仪分析，细胞增殖能力用＊＊T法评价。结果显示：按此方案培养 ·2· 南京医科大学博士学位论文OB到第 3个循环第 6h间刺组与持刺组 Col mRNA含量均高于对照组o分别＜0．01和0．05人间刺组于第24和48h与对照组同水平，而持刺组则降到低于对照组水平；培养液中 COil蛋白浓度在间 刺组在O～6h和25～帕h与对照组相 同（P＞O．05），而在7～24h明显高于对照 组（Prto．001），持卒组于0～6h和25～48h均低于对照组（Prto．001）而仅在7～24h与对照组相同(P＞0．05＼间刺组细胞 ALP表达量产结节数目和细胞层总钙含量均明显高于其他二组，而持刺组细胞上述 3项指标均明显低于其他二组；在第2循环末间刺组与持刺组细胞数目相似，均高于对照组。这些结果提示：叮H间歇刺激体外大鼠OB能增加其骨胶原合成和钙结晶量，其机理是既促进OB数量增多又增强其活性，而 PTH持续刺激虽然也会增加 OB数目，但由于抑制其活性，两者抵销的结果是成骨功能明显减弱。 三PTH?