基于适配体的生物检测技术用于鼠伤寒沙门氏菌的检测研究

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangshuxi
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
食品安全问题是公共卫生领域的主要部分,目前面临的巨大挑战是发展有效识别食品危害的检测方法。本文以鼠伤寒沙门氏菌作为研究模式菌,基于醛基化磁珠(Aldehyde magnetic beads,Mbs)、酶切技术和末端转移酶(Terminal deoxynucleotidyl transferase,Td T)介导的信号放大技术以及纳米金构建了两种可用于食品安全的比色检测的适配体传感器(Aptasensor)。本研究开发了一种基于核酸适配体的可用于食品安全检测的可视化生物传感器(Aptasensor)。首先,利用沙门氏菌适配体和一段与其序列部分互补的捕获探针通过碱基互补配对杂交制备双链DNA(double-stranded DNA,ds DNA)复合物。当待测分析物中有鼠伤寒沙门氏菌时,适配体与鼠伤寒沙门氏菌发生特异性结合,释放出的捕获探针吸附在纳米金表面,保护纳米金颗粒避免其在后续盐诱导作用下发生聚集。而当待测分析物中不含鼠伤寒沙门氏菌时,由于ds DNA的刚性双螺旋结构对纳米金颗粒吸附力较低,导致纳米金粒子在盐的诱导作用下发生团聚,通过裸眼观察溶液在该过程中的颜色变化来实现对沙门氏菌的快速、便捷检测。文中对该方法的可行性、检测性能以及特异性进行逐一表征、验证,结果表明该适配体传感器对浓度为10CFU/m L-10~9CFU/m L范围内的鼠伤寒沙门氏菌有良好的响应性能,线性方程为Y=-0.12998X+1.24411(R~2=0.99262),检测限可达124 CFU/m L,同时也具备良好检测特异性。该方法检测灵敏度高、操作简便、快速、且成本低,在食品安全的现场快速检测应用中具有良好应用前景。本研究还开发了一种基于醛基化磁珠(Aldehyde magnetic beads,Mbs)、酶切技术和末端转移酶(Terminal deoxynucleotidyl transferase,Td T)介导的信号放大技术的可用于食品安全的比色检测的适配体传感器(Aptasensor)。首先利用捕获探针(capture probe,CP)及与其序列互补的适配体(aptamer,Apt)制备了Mbs@ds DNA(double-stranded DNA,ds DNA)杂交复合物,当待测分析物中含有沙门氏菌时,磁珠表面的适配体序列与其发生特异性结合,从磁珠表面释放并通过磁响应去除;此时磁珠表面的捕获探针自身回折,部分碱基互补配对并形成酶切识别区。Eco R I酶切后获得3’-OH端,在末端转移酶的作用下催化脱氧核苷酸(d NTPs)结合到该3’-OH端,获得长单链DNA(single stranded DNA,ss DNA)产物。该过程中,信号报告分子不断嵌入ss DNA中,从而获得增强的沙门氏菌检测信号。当待测物中不含沙门氏菌时,由于捕获探针与适配体3’-OH端均被磷酸基团封闭,且无酶切过程产生的3’-OH端,因此无法引发Td T信号放大反应。该比色适配体传感器对浓度为10 CFU/m L-10~5CFU/m L范围内的鼠伤寒沙门氏菌有良好的响应性能,检出限低至21 CFU/m L,具有较高的灵敏度和特异性。此外,对牛奶样品中沙门氏菌的回收率为92.2%-112.7%(RSD<3%),在食品安全污染物检测及监管方面具有潜在应用价值。
其他文献
池莉作为当代文坛的著名女作家,其小说相较于同时期作家的作品,具有显著的个人特色。自《烦恼人生》于二十世纪八十年代成文时起至今,她获得了来自民间与学界的高度赞誉。就作品内容来谈,首先,她的小说大多以其所居住的城市——武汉为背景,展示了这座中部大城市从计划经济时代到市场经济时代的发展变化。其次,她将人物个性与城市文化糅合起来,形成了别具特色的市民书写。再次,她从书写普通市民的价值取向、欲望追求到描绘城
学位
海洋牧场海域目标鱼种的密度是牧场运行质量的重要标准,鱼类驯化技术与实现装备是提升鱼类丰度的有效支撑。以东海区主要放流对象之一黑鲷为研究对象,围绕水池、网箱、海洋牧场三个部分进行研究。水池驯化区别于传统的水池暂养,在黑鲷幼年期进行基于声音等的驯化印记学习,建立条件反射。网箱暂养使黑鲷逐步适应目标海域,减少应激反应。海上驯化部分根据无人值守自主运行指标对装备的功能结构进行设计,满足驯化要求的同时对其进
学位
对电动汽车车身质量增大带来的轮胎异常磨损进行了悬架硬点分析及优化设计。运用Adams/Car建立双叉臂前悬架刚柔耦合虚拟样机模型,验证了车身质量增大会对外倾角与前束角的匹配关系产生影响,也会增大轮胎侧滑。在优化设计中提出选取更多硬点但仅优化其Z坐标的方案,二次优化与初次优化的结果对比表明,方案可行且可大幅降低优化计算量和缩减研发周期,同时优化后的电动车型双叉臂悬架的车轮外倾角与前束角的匹配关系得到
期刊
自2020年1月1日起,长江流域暂定实行十年禁渔。捕捞是长江流域渔民赖以生存的生计手段,禁渔之后渔民们该何去何从、如何保持禁捕退捕的稳定性以及渔民不再“返捕”是社会各界共同关注的重要课题。生计资本的拥有情况对生计策略的选择有着重要影响,而生计策略直接影响收入。因此,只有退捕渔民通过新的生计策略获取的收入可以满足其生存需要,从根源上杜绝“返捕”的可能,才能保证禁捕退捕的稳定。本文通过对鄱阳湖沿岸退捕
学位
品牌建设是企业发展贸易过程中的重要标准,是提高企业综合实力和市场竞争力的重要引擎。我国作为世界上水产品市场中主要的生产和消费的国家,水产品品牌市场的也在不断地发展,但是大多数品牌建设多集中在水产品加工类企业,又由于我国水产品牌发展起步较晚且重视时间不长,在水产市场中还存在许多假冒品牌,导致水产品牌的发展稍稍滞后了许多,这些都造成了市场秩序的不稳定,从而也会降低了消费者对所购产品和获得服务的满意度。
学位
近年来,国家对渔业的支持以及政策的扶持效果显著,我国水产品的供给能力也不断增强。随着我国渔业产业的迅猛发展,越来越多的学者开始对渔业产业结构相关领域进行研究。在我国生态文明建设的背景下,调整渔业产业结构,促进渔业产业结构优化升级,实现渔业产业高质量发展,成了众多学者共同关注的问题。在现有的研究中,对于渔业产业结构与经济、渔业产业结构与消费结构之间的关系等问题的研究较多,且研究对象多为辽宁省、山东省
学位
<正>2022年南航首届机务智慧维修创新大赛正式启动为全面贯彻国家“十四五”发展规划和民航局智慧民航建设,南航工程技术分公司于近日启动南航首届机务智慧创新大赛。此次大赛是南航机务系统承办的首届公司级智慧维修创新大赛,是一次理念与机制上的创新,填补了机务维修技能竞赛的空白。
期刊
2021年中央一号文件发布,内容指出我党工作的重中之重是要坚持解决好“三农”问题,坚持全面推进乡村振兴,要通过全党和全社会的共同努力来加快发展农业农村现代化,旨在为我国的农民提供更加良好的生产环境和美好的生活氛围。长期以来在我国,如何促进农民收入增长这一问题一直面临着多重困难,因为我国农业的结构不够合理、和其他产业联系不够密切,农业技术化水平低,同时又因为农民自身的文化素质比较低,因此农民的就业的
学位
乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是乳腺癌的一线化疗药物之一,可通过促进微管聚合并阻止其解聚而发挥抗肿瘤作用,但研究发现PTX可通过调控ATF3的表达引起乳腺癌的转移,影响PTX对乳腺癌治疗的有效性。ATF3作为转录激活因子参与乳腺癌的发生发展过程,但其在乳腺癌中的作用机制尚未完全阐明。通关藤注射液(Tong-Guan-Teng Injection,TGT)是
学位
盆腔器官脱垂(Pelvic organ prolapse,POP)作为女性常见慢性病,严重影响生存质量。盆底重建手术用于中重度POP的治疗,常使用不可降解的聚丙烯合成网片作为手术材料进行修补,但术后易产生如疼痛、感染等不良反应。近年来,虽然POP的治疗已取得显著进展,但实现盆底结缔组织和肌肉组织的修复与再生仍较为困难。组织工程可在一定程度上解决器官损伤引发的疾病,基于组织工程的生物材料作为盆底重建
学位