分散固相萃取用于氟虫腈和多环芳烃暴露鼠兔血浆代谢产物的研究

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近期欧洲“毒鸡蛋”事件将食品安全问题再次推到公众眼前。氟虫腈农药的大量使用严重威胁着农产品的安全,尤其是毒性较大的氟虫腈代谢产物。相关开展氟虫腈代谢产物及其代谢动力学的研究报道尚少。多环芳烃暴露导致的健康威胁日益成为全球所关注的问题,每天自然环境和人类活动都会产生大量的多环芳烃并排放至周围环境中。氟虫腈及其多环芳烃等外源性毒物,在较小剂量就能够对生物体产生损害作用或使生物体产生异常反应。为了研究毒物暴露动物体内吸收、代谢和消除的过程,毒物代谢产物及其代谢动力学已经成为该领域的研究热点。本研究以小鼠和新西兰兔为模型,针对人们普遍关注的、毒性大、易于在动物产品中蓄积的氟虫腈和多环芳烃为目标毒物,采用分散固相萃取前处理方法,结合高效液相色谱-电喷雾串联质谱建立了血浆样品中毒物及其代谢产物的定性分析和定量分析的新方法。分别开展氟虫腈和多环芳烃暴露鼠兔血浆代谢产物及其代谢动力学的研究,并进一步考察了毒物与血浆蛋白的结合率。从分子层面探究氟虫腈及其多环芳烃代谢产物的毒性,为毒物作用机理的研究和安全性标准的制定提供科学的实验数据。研究内容如下:(1)采用水热法成功制备Uio-66/MIL125二元金属有机骨架纳米复合材料。以Uio-66/MIL125作为吸附剂,基于选择性分散固相萃取结合超高效液相色谱-线性离子阱质谱(UHPLC-MSn),建立血浆样品中氟虫腈及其代谢产物的快速测定方法。在最佳的分散固相萃取条件下,方法学考察的线性范围为1-1000 ng·mL-1,回归系数≥0.9904;检出限为0.3-0.5 ng·mL-1,定量限为0.8-2.0 ng·mL-1,方法的回收率为90.62-112.59%。通过开展鼠兔暴露氟虫腈的代谢产物及其代谢动力学研究,对给药剂量、药物体液残留浓度和代谢产物关系的探索,初步阐明毒物暴露动物产生毒性的量效关系和时效关系。该方法的灵敏度,选择性和准确度均满足生物样品中毒物及其代谢产物定量分析的要求,为毒物的快速测定提供一个综合的解决方案。(2)采用水热法成功制备了具有两亲性质的磁性介孔二硫化钼/石墨纳米复合物(mag-MoS2/GN)。以mag-MoS2/GN作为吸附剂,基于选择性分散固相萃取结合气相色谱-质谱(GC-MS)建立了血浆样品中多环芳烃的快速测定方法。方法学考察的线性范围为1-500 ng·mL-1,回归系数≥0.9902,检出限为0.05-0.54 ng·mL-1,定量限为0.5-1.5 ng·mL-1,回收率为73.63-111.2%。与已报道的方法相比,本方法对轻质多环芳烃的选择性高,线性范围宽和萃取效率高。通过开展鼠兔暴露多环芳烃的代谢产物研究,初步阐明多环芳烃引起实验动物毒性的量效关系和时效关系。为PAHs暴露的测定提供更为高效、准确的技术手段。(3)采用简单、经济的平衡透析法,开展体外模拟氟虫腈与动物血浆蛋白结合率的测定,研究毒物与血浆蛋白的结合率,考察氟虫腈的毒理活性,揭示其在哺乳动物体内的毒代动力学过程。研究结果发现氟虫腈的血浆蛋白结合率处于中度结合水平,表明氟虫腈的毒性较小。本实验为毒物代谢动力学及其在组织中的分布提供参考,为临床解毒治疗提供理论依据。
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