【摘 要】
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方剂配伍是中医防治疾病的主要用药方式,临床实践证明,较之单味用药,方剂的疗效和安全性均存在很大的优势。方剂配伍并非简单的药味相加,而是遵循“七情和合”等配伍理论优化而成的“有制之师”。因此,研究方剂的配伍规律、阐述其增效减毒机制,对于阐明方剂作用的物质基础,完善方剂质量标准以及临床合理用药均具有重要意义。肾脏有机阴离子转运蛋白(organic anion transporters,OATs)是由肾
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方剂配伍是中医防治疾病的主要用药方式,临床实践证明,较之单味用药,方剂的疗效和安全性均存在很大的优势。方剂配伍并非简单的药味相加,而是遵循“七情和合”等配伍理论优化而成的“有制之师”。因此,研究方剂的配伍规律、阐述其增效减毒机制,对于阐明方剂作用的物质基础,完善方剂质量标准以及临床合理用药均具有重要意义。肾脏有机阴离子转运蛋白(organic anion transporters,OATs)是由肾小管分泌能够转运众多有机阴离子(organic anions,OAs)的一类转运蛋白,参与介导一些毒物、药物及其代谢物经肾脏的转运及排泄,进而维护着机体内环境。经研究表明,OATs一旦被某些药物、食物中的成分所抑制,可能会干扰体内其他OATs底物的正常排泄,从而导致人体排泄异常,甚至会出现毒性反应。复方玉屏风(YPF,Yu-ping-feng Prescription)是由黄芪(AM,Astragalus mongholicus)、白术(RA,Largehead Atractylodes Rhizome)和防风(SD,Divaricate Saposhnikovia Root)三味中药材所组成的非处方药,具有益气固表止汗、补脾实胃的功效,主要适应症包括过敏性鼻炎、反复发作性上呼吸道感染、因表虚而引起的自汗等病症。目的(1)整体动物水平:通过Western blot法及RT-PCR法观察长时间给予YPF及各组分水煎剂对大鼠肾组织中OAT1/3蛋白及mRNA表达的影响。(2)细胞水平:考察YPF水煎剂、各组方水煎剂、部分“药动学成分群”对人胚肾细胞-293(Human embryonic kidney 293 cell,HEK-293)中OAT1/3蛋白及mRNA表达的影响,并比较各组分对OAT1/3蛋白和mRNA表达的影响。方法整体动物:将大鼠随机分配5组,每组6只,即生理盐水组(NE组)、YPF组、AM组、RA组及SD组,灌胃连续给药21天,NE组采用0.9%的生理盐水(saline)替代。在第21天处理各组大鼠,收集肾组织。Western blot法及RT-PCR法检测肾组织中OAT1/3蛋白及mRNA的表达。细胞实验:(1)MTT法确定各组给药浓度:体外培养人胚胎肾细胞HEK-293,以不同浓度YPF水煎剂、AM水煎剂、RA水煎剂、SD水煎剂及单一活性成分升麻苷(POG,Prim-O-Glucosylcimifugin)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(OM,5-O-methylvisammioside)、白术内酯Ⅰ(AT-I,Atractylenolide I)、白术内酯Ⅲ(AT-III,Atractylenolide III)给药孵育24h,MTT法检测其对HEK-293细胞生存率的影响;同时用MTT法检测YPF水煎剂对HEK-293细胞48h、72h的细胞生存率的影响。(2)以MTT法所选给药浓度刺激细胞,Western blot法及RT-PCR法检测各给药组HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及mRNA表达变化。结果1.YPF、SD水煎剂能显著降低大鼠肾脏中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。RA水煎液降低了大鼠肾脏OAT1蛋白及mRNA的表达水平,但升高了OAT3蛋白及mRNA的表达水平。2.YPF、SD水煎剂均能不同程度降低HEK-293细胞中OAT1/3蛋白及mRNA的表达水平。RA水煎液降低了HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA的表达水平但升高了OAT3蛋白及mRNA的表达水平。3.AT-I(30μg/ml)、POG(30μg/ml)、OM(50μg/ml)能显著降低HEK-293细胞中的OAT1/3蛋白及mRNA表达水平。AT-III(30μg/ml)降低了HEK-293细胞中OAT1蛋白及mRNA的表达但明显升高OAT3蛋白及mRNA的表达水平。结论1.YPF水煎剂可抑制肾脏OAT1和OAT3基因和蛋白的表达,抑制其底物的排泄,这可能是其主要成分黄芪甲苷大鼠体内药动学参数改变的主要原因之一。2.YPF水煎剂对HEK-293细胞OAT1和OAT3蛋白的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性。3.SD水煎剂中存在某些活性成分的抑制作用可能是YPF产生抑制OAT1和OAT3蛋白的主要原因之一。RA内存在某些成分对OAT1蛋白表达产生抑制作用,RA内存在某些成分提高了OAT3蛋白的表达。而AM水煎剂对OAT1和OAT3蛋白表达无抑制作用。这一结果验证了群臣佐使的组方理论,为阐明组方药动学配伍机制提供了信息。
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