【摘 要】
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目的:通过研究低强度激光条件下对结肠癌RKO细胞死亡受体通路凋亡因子的表达是否上调,探讨低强度激光疗法对于结肠癌RKO细胞死亡受体凋亡途径的关系;初步探究低强度激光疗法对结肠癌RKO细胞凋亡的影响及可能涉及的机制,为低强度激光在结肠癌的临床治疗提供研究基础。方法:结肠癌RKO细胞的培养及选择适合实验的细胞浓度:相同条件下,按照倍比稀释法培养结肠癌RKO细胞,在同一时间点,以MTS方法检测细胞活性,
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目的:通过研究低强度激光条件下对结肠癌RKO细胞死亡受体通路凋亡因子的表达是否上调,探讨低强度激光疗法对于结肠癌RKO细胞死亡受体凋亡途径的关系;初步探究低强度激光疗法对结肠癌RKO细胞凋亡的影响及可能涉及的机制,为低强度激光在结肠癌的临床治疗提供研究基础。方法:结肠癌RKO细胞的培养及选择适合实验的细胞浓度:相同条件下,按照倍比稀释法培养结肠癌RKO细胞,在同一时间点,以MTS方法检测细胞活性,选择具有显著统计学意义的细胞量组别作为适合实验的细胞浓度;不同剂量低强度激光对结肠癌RKO细胞照射模型的构建:将适合实验的细胞浓度分为五个实验组,分别为对照组(Con组:0J/cm~2)、实验组(1J/cm~2、5J/cm~2、10J/cm~2、15J/cm~2),将分组结肠癌RKO细胞分别给予相应低强度激光照射,定期观察并拍照记录,在同一时间节点,以MTS方法处理细胞,检测分组的细胞活性并进行统计学分析,初步明确低强度激光在结肠癌RKO细胞的作用;结肠癌RKO细胞死亡受体凋亡途径凋亡基因检测:将构建的实验模型细胞培养后,提取总RNA,采用RT-PCR法测定凋亡基因TNFR1、TRADD、Caspase-8在RNA水平的表达,采用RT-q PCR法测定凋亡基因TNF-α、Caspase-3在RNA水平的表达。结果:通过MTS实验,等比数量人结肠癌RKO细胞的最适实验浓度为12500细胞/孔,(P<0.01);在不同实验低强度激光能量密度的分组中,对照组(Con组:0J/cm~2)与实验组(1J/cm~2、5J/cm~2、10J/cm~2、15J/cm~2)经过MTS实验检测可知,结肠癌RKO细胞随着能量密度的增加,所测的OD值也随之下降,在15J/cm~2时,结肠癌RKO细胞的存活较对照组显著性下降(P<0.01);对照组与试验组通过RT-PCR试验,检测细胞凋亡途径中的TNFR1、TRADD、Caspase-8三个基因,结果提示,随着低强度激光能量密度的增加,三个基因均出现上调趋势,在15J/cm~2时,TNFR1、TRADD、Caspase-8三个基因相比较与对照组均具有显著性上调(P<0.01);通过RT-q PCR试验,检测细胞凋亡途径中的TNF-α、Caspase-3两个基因,随着低强度激光能量密度的增加,两个基因均出现上调趋势,在15J/cm~2时,TNF-α、Caspase-3两个基因相比较与对照组均具有显著性上调(P<0.01);5个基因的上调趋势与MTS实验OD值的下调存在相关性。结论:低强度激光条件下对结肠癌RKO细胞具有促进凋亡的趋势,可能与低强度激光照射后死亡受体凋亡途径相关基因表达上调有关,提示低强度激光疗法能够激活死亡受体凋亡途径促使结肠癌RKO细胞的凋亡。
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