【摘 要】
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沙门菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病原菌,是全球食源性传染病的主要病原菌之一,已报道有2600多种血清型,呈全球性分布,我国目前已报道至少292个,不仅可以水平传播,还可以垂直传播,严重危害人畜健康。沙门菌广泛存在于家禽养殖场,有的可造成临床发病,有的可引起隐性感染。沙门菌抗体检测可用于判定是否感染沙门菌,最常用的方法是玻板凝集试验(Plate agglutination test
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沙门菌(Salmonella)是一种重要的人畜共患病原菌,是全球食源性传染病的主要病原菌之一,已报道有2600多种血清型,呈全球性分布,我国目前已报道至少292个,不仅可以水平传播,还可以垂直传播,严重危害人畜健康。沙门菌广泛存在于家禽养殖场,有的可造成临床发病,有的可引起隐性感染。沙门菌抗体检测可用于判定是否感染沙门菌,最常用的方法是玻板凝集试验(Plate agglutination test,PAT),酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一种比较特异敏感的检测方法。脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是沙门菌细胞壁的重要组成部分,O抗原是其组成成分之一,目前建立的ELISA抗体检测方法多为针对LPS抗原。因此,及时掌握沙门菌的分布流行情况,研制针对LPS单抗的检测方法,对沙门菌病的防控具有重要意义。本研究对2018-2019年华东地区的沙门菌进行了流行病学调查及耐药性分析,利用灭活菌结合LPS免疫的方法研制单抗,为建立沙门菌病的防控奠定基础。1.2018-2019年华东地区禽源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析为了解华东地区家禽中沙门菌的流行和耐药情况,于2018年-2019年采集疑似沙门菌感染病例样品进行沙门菌的分离,结合多重聚合酶链式反应(Multiplex polymerase chainreaction,mPCR)和血清凝集试验确定其血清型,利用药敏纸片法测定沙门菌分离株对21种常用抗生素的耐药性。结果显示,共鉴定出84株沙门菌,其中鼠伤寒沙门菌(S.typhimurium)36 株,鸡白痢沙门菌(S.pullorum)30 株,肠炎沙门菌(S.enteridstis)5株,德尔卑沙门菌(S.derby)5株,纽波特沙门菌(S.newport)1株,波斯坦沙门菌(S.potsdam)2株,都柏林沙门菌(S.dublin)2株,斯坦利沙门菌(S.stanley)1株和猪霍乱沙门菌孔成道夫生物型(S.cholerf)raesuis biotype Kunzendorf)2株。药敏试验结果显示,分离株普遍对青霉素、苯唑西林、利福平和四环素耐药,尤其对苯唑西林和利福平的耐药率达到了 100%,对环丙沙星、庆大霉素和复方新诺明的敏感率较高,均达到了 85%以上,多重耐药率高达90.48%。通过PCR方法对76株具有多重耐药性的菌株进行I类整合子的检测,2株沙门菌可扩增出可变区的目的条带,分别携带aadA22基因和aadA16-afdA27组合基因盒,可导致菌株对氨基糖苷类药物和磺胺类药物产生耐药。以上结果表明,2018-2019年华东地区禽源沙门菌分离株主要为鼠伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌,且多重耐药性严重,应予以持续监测。2.鸡白痢、肠炎和鼠伤寒沙门菌脂多糖单克隆抗体的研制采用热酚水法分别提取鸡白痢沙门菌(S44)、肠炎沙门菌(C50041)及鼠伤寒沙门菌(S016)的LPS和煮沸灭活的菌体作为免疫原,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,成功制备了 7株单克隆抗体。C50041组得到4株单抗,分别命名为1C2、1C5、2C7和2C8;S016组得到2株单抗,分别命名为7F6和3H6;S44组得到1株单抗,命名为1E4。其中1C2和7F6的重链亚类为IgGI,1C5、2C7和2C8的重链亚类为IgG3,3H6和1E4的重链亚类为IgM。玻板凝集试验显示,单抗可识别O5、O9和O12抗原;玻板凝集试、间接ELISA试验和Western-blot试验结果显示,1C5株单抗能与含有O12抗原(肠炎、鸡白痢、鼠伤寒等)沙门菌发生特异性反应。本研究为进一步建立高灵敏度、高特异性、高稳定性的含O12沙门菌的检测方法奠定基础。
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