核酸探针应用于重金属的快速检测方法研究

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目前,重金属污染已对人类生存环境造成了极大的威胁,随着工业化的不断发展,大量生活污水和工业废水排入水体,进入水体的重金属离子可以通过生物链的蓄积进入人体,严重威胁着人类的健康和安全。因此,为应对全球污染,发展简单、快速、高效的重金属离子检测方法显得愈发重要。核酸探针具有实时、稳定、灵敏等分析检测优点,其在生化分析、环境监测、基础医学、新药的合成及筛选等方面展现出广阔的应用前景。因此,在本文将以核酸适配子技术为基础,利用比色法对环境中银离子和砷离子进行痕量检测,主要研究内容如下:(1)基于阳离子聚合物高效聚集纳米金比色法检测银离子。阳离子聚合物聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐(PDDA)一方面可以与单链核酸(ssDNA)通过静电相互作用形成复合结构,另一方面可以高效聚集纳米金。当不加入银离子时,ssDNA会与PDDA形成杂交结构,由于PDDA的消耗,纳米金处于分散状态,溶液成红色。当加入银离子时,ssDNA中胞嘧啶(C)与Ag~+形成C-Ag~+-C错配,特异性结合形成发卡结构,因此释放的PDDA会引起纳米金的聚集,形成蓝色溶液。随着Ag~+加入量的增加,溶液由红色逐渐变为蓝色。溶液在650nm和520nm处吸光度的比值与Ag~+的加入量成正向关系,所以通过溶液颜色变化,就可以实现水体中银离子检测,并获得48.6nM的检测限。(2)基于氯化血红素催化TMB显色比色法检测砷离子。氯化血红素(Hemim)是金属卟啉化合物,具有辣根过氧化物酶(HRP)活性,在过氧化氢的存在下可以催化3,3’5,5’-四甲基联苯胺(TMB)形成蓝色阳离子根,过量的Hemin可以继续催化阳离子根形成黄色的联苯醌。当不加入砷离子时,ssDNA会抑制Hemin的催化活性。当加入砷离子时,ssDNA与As(III)特异性结合形成复合结构,这种复合结构会阻碍Hemin与ssDNA的堆积作用,恢复Hemin的催化能力,加快黄色产物的生成。随着砷加入量的增加,溶液由蓝色逐渐变为黄色。溶液在442nm处吸光度与砷的加入量成正向关系,所以通过溶液颜色变化,可以实现水体中砷离子检测。
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