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本研究建立饲料样品和尿液样品中泼尼松(Prednisone)、泼尼松龙(Prednisolone)、甲基泼尼松龙(MethylPrednisone)、地塞米松(Demxamethasone)、倍他米松(Betamethasone)、倍氯米松(Beclometasone)、醋酸氟氢可的松(Fludrocortisone Acetate)、醋酸可的松(Cortisone Acetate)、氢化可的松(Hydrocortisone)等9种糖皮质激素类药物的测定方法。饲料样品以甲醇为提取溶剂,震荡提取后,采用固相萃取净化技术进行净化,其中碳黑柱串接氨基柱净化效果最好,采用蠕动泵连续进样进行质谱参数优化,采用ESI-离子模式进行调谐,发现糖皮质激素类药物的离子峰有[M+H]+、[M-H]-、[M+HCOO]-等多种形式,其中[M+HCOO]-响应最高,因此选择目标化合物的[M+HCOO]-作为碰撞诱导解离的母离子。醋酸氟氢可的松和醋酸可的松的特征碎片离子为[M-H]-和[M-H-HCOOCH3]-,其他7种糖皮质激素的特征碎片离子为[M-H]-和[M-H-CH2O]-。用30%乙腈作为上机液。通过在空白饲料中添加3个不同浓度(低、中、高三个浓度)的9种糖皮质激素类药物进行准确度试验,每个浓度做6个平行样,重复3次。本方法在空白饲料中进行5ng/g～20ng/g的添加,方法的回收率为51.1%～88.2%,批内、批间相对标准偏差均小于20%。本方法适用于配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料中9种糖皮质激素单个或混合物的测定。最低检出限为2μg/kg,最低定量限为5μg/kg。尿液样品采用5mL尿液中加入50μLβ-盐酸葡萄糖醛苷酶-芳基硫酸酯酶,在pH=5.2的乙酸铵缓冲液条件下,37℃下酶解。采用乙酸乙酯提取,通过HLB串接氨基柱净化,回收率稳定,重现性较好。经过试验对比采用乙酸乙酯-甲醇(60:40)为洗脱溶液,选用乙腈-水(30:70)溶液为上机进样溶液。在空白尿液中添加低、中、高3个不同浓度的9种糖皮质激素类药物进行准确度试验,每个浓度做6个平行样,重复3次。本方法在尿样中进行1ng/mL～5ng/ml的添加,方法的回收率为55.0%～106.2%,批内、批间相对标准偏差均小于20%。本方法适用于动物尿液中9种糖皮质激素单个或混合物的测定。方法的最低检测限为0.5μg/L,最低定量限为1.0μg/L。本研究建立了饲料和尿液中9种糖皮质激素的测定方法-液相色谱-串联质谱方法,明确规定了适用范围、确定了取样量、酶解、提取净化等方法以及液相色谱条件、串联质谱条件等;具有较好的灵敏度、准确度和精密度,完全适合饲料和尿液样品中9种糖皮质激素药物的测定,可以为饲料质量安全监测提供良好的技术支撑。