鳗弧菌rpoS功能的研究

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rpoS基因编码RpoS因子(RNA聚合酶的σ亚基),能增强细菌细胞对外界不良环境的抗逆性和适应能力。我们从鳗弧菌(Vibrio anguillarum)M3 Fosmid文库中得到rpoS基因序列,全长999bp,同源分析发现与大肠杆菌(Escherichia coli)有71%的相似性,与霍乱弧菌(Vibrio cholerae )有78%的相似性。为了研究rpoS在鳗弧菌中的作用,我们利用in-frame deletion技术构建了rpoS基因的非极性缺失突变株,同时利用细菌的接合转移,以低拷贝克隆质粒pSUP202为载体,构建了突变株的互补株。在TSB培养基中,rpoS基因的缺失减缓了鳗弧菌对数期的生长,但促进了鳗弧菌在42℃中的生长。由于rpoS基因的缺失,对数期鳗弧菌在1M蔗糖和5M NaCl(渗透压胁迫)和5%(v/v)乙醇中的生长减缓,而对平台期的影响不大。不同生长时期的鳗弧菌对15mM H2O2的反应有所不同,rpoS的缺失使对数期的鳗弧菌对15mM H2O2的反应更加敏感。在rpoS基因互补株中,上述表型基本恢复到野生型水平。感染实验表明,rpoS基因的缺失使鳗弧菌的LD50提高了20倍。rpoS的突变对鳗弧菌的泳动和胞外酶的产生也有影响。突变株泳动圈直径是野生型的73.8%,在明胶平板和酪蛋白平板上的透明圈直径分别为野生型的61%和69%。通过azocaseion检测胞外产物ECP酶活发现,突变株的酶活是野生型的35.5%。以上数据表明了RpoS在鳗弧菌对数期应对外界不良环境时起到了重要作用,同时参与了鳗弧菌的致病过程。
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