马骨胶原蛋白肽制备及组织结构分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiawei0018
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本研究选用不同年龄的马骨作为实验材料,采用骨组织染色法分析了马骨中胶原纤维及钙盐沉积分布,超高压法优化了马骨脱脂工艺,酸酶结合法提取马骨中胶原蛋白进一步制备胶原蛋白肽,并对得到的胶原蛋白肽进行了抗氧化活性分析。结果如下:采用染色和图像分析技术对马骨中胶原的含量及钙盐分布特点进行观察,结果显示:13岁马骨胶原纤维疏松、排列紊乱及密度分布不均匀,与2岁马和8岁马对比有显著差异(P<0.05),而2岁和8岁马之间无显著差异(P>0.05)。与牛羊等其它家畜骨相比,成年马骨的胶原纤维形状整齐规则、密度均匀、排列有序、较为密集并且骨密度较高。利用超高压辅助乙酸乙酯溶液对马骨粉进行脱脂,并通过单因素及正交试验优化脱脂条件,得到的最优工艺条件为:超高压压力300MPa、保压时间9min、料液比1:15g/m L,在此条件下,马骨脱脂率达到73.56%。利用酸酶结合法提取马骨胶原蛋白,并研究了它的结构表征。对不同年龄的马骨胶原蛋白进行热稳定性分析,结果表明:不同年龄的马骨胶原蛋白的变性温度均随年龄増加而略有增加。超高压处理后的马骨胶原蛋白的热变性温度略低于传统方式处理的马骨胶原。这是由于超高压处理后骨粉中胶原蛋白交联键断裂,稳固性变弱导致热稳定性下降。以实验提取的胶原蛋白为材料,研究碱性蛋白酶对胶原蛋白短肽提取率的影响,对酶解温度、酶解时间、p H值、加酶量四个因素进行筛选。经正交实验优化得到最佳酶解马骨胶原蛋白工艺条件为:酶解温度55℃、p H值9.0、酶用量4%、酶解时间4h,此条件下短肽得率为66.24%。将胶原蛋白肽通过超滤分离得到分子量5-10KDa、3-5KDa、1-3KDa、<1KDa的胶原蛋白肽,并对其抗氧化作用进行了分析,结果表明:胶原蛋白肽的抗氧化活性随着浓度的增加而増加。超滤得到的4组分子量肽中,分子量为1-3KDa的胶原蛋白肽抗氧化活性显著高于(P<0.05)其它分子量组分。相同分子量条件下不同年龄的马骨胶原蛋白肽的抗氧化活性不同,其中8岁马骨的抗氧化活性较强。
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