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目的:探讨EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染对MUS81(methl methanesulfonate and UV sensitive isolate number 81,对乙烷磺酸盐及紫外线敏感的第81号独立序列)表达的影响,研究MUS81基因在EBVaGC发生中的作用和作用机制。方法:(1)采用实时荧光定量PCR技术(Real time quantitative PCR,qRT-PCR)检测EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系中MUS81、EME2(essential meiotic structure-specific endonuclease subunit 2,必需减数分裂结构-特异性内切酶亚基2)及其相关基因在转录水平上的差异;(2)Western blot技术检测两种细胞系中MUS81和EME2蛋白表达的差异;(3)分别构建稳定转染EBV潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein1,LMP1)、潜伏膜蛋白2A(Latent membrane protein 2A,LMP2A)、EBV编码小RNA(Epstein-Barr virus coded small RNA,EBER)的SGC7901细胞系,检测外源性LMP1、LMP2A、EBER表达对MUS81表达的影响;(4)免疫组化技术检测EBV阳性胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVa GC)和EBV阴性胃癌(EBV-negative gastric carcinoma,EBVn GC)组织中MUS81蛋白的表达;(5)亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisulfite genomic sequencing,BGS)检测EBV阳性和阴性胃癌细胞系中MUS81基因启动子区Cp G岛甲基化状态,并用去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理BGC823、SGC7901和稳定转染LMP1的SGC7901细胞系,观察对MUS81表达的影响,分析EBV对MUS81表达和MUS81甲基化状态的影响;(6)检测si RNA靶向沉默MUS81和EME2表达后对细胞周期和凋亡的影响。结果:(1)qRT-PCR结果显示,EBV阴性胃癌细胞系中MUS81基因、EME2基因和SLX4基因转录水平明显高于EBV阳性胃癌细胞系;EBV阳性胃癌细胞系中SLX1基因转录水平明显高于EBV阴性胃癌细胞系;两种细胞系中EME1的转录水平没有明显差异。(2)Western blot技术检测结果显示,EBV阴性胃癌细胞系MUS81和EME2蛋白表达水平均明显高于EBV阳性胃癌细胞系。(3)与SGC7901-NC(稳定转染空载质粒的SGC7901细胞系)比较,SGC7901-LMP1、SGC7901-LMP2A和SGC7901-EBER细胞系(稳定转染LMP1、LMP2A、EBER的SGC7901细胞系)MUS81转录水平没有发生明显变化。Western blot检测显示,SGC7901-LMP1,SGC7901-LMP2A,SGC7901-EBER细胞系MUS81蛋白表达与SGC7901-NC细胞系比较没有显著性差异。(4)q RT-PCR检测结果显示,用5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理SGC7901-LMP1细胞系MUS81的转录水平及蛋白表达水平没有发生明显变化。(5)EBV阴性胃癌细胞系MUS81基因启动子区甲基化水平明显高于EBV阳性胃癌细胞系。Western blot检测结果显示5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理EBV阴性胃癌细胞系后MUS81蛋白表达水平没有发生明显变化。(6)EBV阳性胃癌组织中MUS81蛋白表达水平明显低于阴性胃癌组织。(7)SGC7901细胞沉默MUS81蛋白表达,与对照组相比,细胞发生G2/M期阻滞(P<0.05),而凋亡率无明显差异(P>0.05);沉默EME2表达后,与对照组相比,G2/M期细胞比值增高(P<0.05),凋亡细胞比例增高(P<0.05)。结论:(1)EBV可抑制胃癌细胞系MUS81及其异二聚体EME2表达,MUS81基因启动子区的甲基化可能不参与其蛋白表达调控。(2)外源性LMP1、LMP2A和EBER表达对MUS81转录和蛋白表达没有明显影响。(3)沉默MUS81和EME2表达可使胃癌细胞系SGC7901阻滞在G2/M期,而下调EME2表达可促进SGC7901细胞凋亡,下调MUS81表达则对SGC7901细胞凋亡无明显影响。