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【目的】明确羊乳对葡萄糖代谢的调节作用及其机制。【方法】研究分为两部分。第一部分为羊乳对1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)的辅助改善作用及其机制研究。180±20g雄性SD大鼠腹腔注射60mg/kg链脲佐菌素(streptozocin,STZ),将建模成功的48只糖尿病大鼠随机分为6组,每组8只,每日灌胃,持续30天:糖尿病模型组(去离子水)、羊乳低、中、高剂量干预组(2.5g/kg、5g/kg、10g/kg羊乳粉)、牛乳干预组(10g/kg牛乳粉)和二甲双胍对照组(0.2g/kg二甲双胍)。未造模大鼠随机分成空白对照组(去离子水)、羊乳高剂量对照组(10g/kg羊乳粉)。第0、15、30日测量空腹血糖。实验第22日进行胰岛素耐量试验(insulin resistance test,ITT),实验第28日进行葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)。实验第30日,处死大鼠,收集血样分析CHO、TG、HDL、LDL、HbA1c、脂联素、胰岛素、GLP-1、PYY、TNF-α水平。Western blot检测肝脏中AMPK、PEPCK、G6Pase等蛋白的表达水平,检测骨骼肌中AMPK、GLUT4、hexokinase2等蛋白的表达水平。大鼠处死后采集结肠内容物,检测分析肠道菌群和短链脂肪酸。第二部分为羊乳对高脂膳食诱导血糖代谢紊乱的改善作用及其机制研究。4周龄雄性SD大鼠72只,按体重随机分成分9组,每组8只,自由摄入下列饲料20周:空白对照组(维持饲料)、高脂饲料模型组(高脂饲料)、二甲双胍组(含有0.28%二甲双胍的高脂饲料)、4个剂量羊乳干预组(含有2.5%、5%、10%、30%羊乳粉的高脂饲料)、30%牛乳干预组(含有30%牛乳粉的高脂饲料)、10%羊乳对照组(含有10%羊乳粉的维持饲料)。第0、4、8、12、16、20周测量空腹血糖。实验18、19周分别进行ITT和OGTT试验。实验20周,处死大鼠,收集血样分析CHO、TG、HDL、LDL、HbA1c、脂联素、瘦素、胰岛素、GLP-1、PYY水平。Western blot检测肝脏中AMPK、PEPCK、G6Pase表达水平,检测骨骼肌中AMPK、GLUT4、hexokinase2等蛋白表达水平。收集肝门静脉血检测短链脂肪酸,收集结肠内容物分析肠道菌群和短链脂肪酸。【结果】1.羊乳对STZ诱导的T1D血糖改善作用研究结果如下:(1)实验第0、15、30日STZ造模大鼠血糖浓度显著高于空白对照组(P<0.05)。实验第30日,羊乳高剂量干预组的血糖水平显著低于糖尿病模型组(P<0.05)。STZ造模大鼠OGTT和ITT试验曲线下面积显著高于空白对照组(P<0.05),羊乳高剂量干预组OGTT和ITT试验曲线下面积显著小于糖尿病模型组(P<0.05)。(2)糖尿病模型组HbA1c比例显著高于空白对照组(P<0.05)。与糖尿病模型组相比,羊乳中、高剂量干预组的HbA1c比例显著降低(P<0.05)。糖尿病模型组胰岛素、GLP-1浓度显著低于空白对照组(P<0.05),TNF-α水平显著高于空白对照组(P<0.05)。羊乳高剂量干预组胰岛素浓度显著高于糖尿病模型组(P<0.05)。羊乳中、高剂量干预组TNF-α浓度显著低于糖尿病模型组(P<0.05)。羊乳低、高剂量干预组GLP-1浓度显著高于糖尿病模型组(P<0.05)。(3)与空白对照组相比,糖尿病模型组肝脏和骨骼肌中p-AMPK/AMPK比值降低;与糖尿病模型组相比,羊乳高剂量干预组肝脏和骨骼肌p-AMPK/AMPK比值显著增高(P<0.05)。糖尿病模型组大鼠肝脏中的PEPCK、G6Pase蛋白表达水平显著高于空白对照组(P<0.05)。羊乳高剂量干预组、牛乳干预组肝脏PEPCK蛋白表达水平显著低于糖尿病模型组(P<0.05)。(4)与空白对照组相比,糖尿病模型组的Lachnospiracea incertae sedis、Parabacteroides丰度显著增高,Lactobacillus丰度显著降低。经羊乳高剂量干预后Lachnospiracea incertae sedis、Parabacteroides丰度显著降低(P<0.05),Lactobacillus丰度显著增加(P<0.05)。(5)羊乳高剂量干预组丙酸、丁酸浓度显著高于糖尿病模型组(P<0.05)。2.羊乳对高脂膳食诱导的血糖代谢紊乱的改善作用研究结果如下:(1)从第12周至第20周,高脂饲料喂养大鼠血糖浓度显著高于空白对照组(P<0.05)。实验第16周末,10%羊乳干预组血糖水平显著低于高脂饲料模型组(P<0.05)。实验第20周末,10%、30%羊乳干预组血糖浓度显著低于高脂饲料模型组(P<0.05)。(2)高脂饲料喂养大鼠OGTT、ITT试验曲线下面积显著高于空白对照组大鼠(P<0.05)。10%、30%羊乳干预组OGTT曲线下面积显著小于高脂饲料模型组(P<0.05)。10%羊乳干预组ITT曲线下面积显著小于高脂饲料模型组(P<0.05)。(3)与空白对照组相比,高脂饲料模型组TG浓度显著升高(P<0.05)。5%、10%、30%羊乳干预组和30%牛乳干预组TG浓度显著低于高脂饲料模型组(P<0.05)。高脂饲料模型组瘦素水平显著高于空白对照组(P<0.05),经5%、10%羊乳干预后瘦素水平显著降低(P<0.05)。高脂饲料模型组GLP-1浓度显著低于空白对照组(P<0.05),经5%羊乳干预后GLP-1浓度显著增高(P<0.05)。(4)与空白对照组相比,高脂饲料模型组肝脏和骨骼肌中p-AMPK/AMPK比值降低,经10%、30%羊乳干预后该比值显著增高(P<0.05)。10%、30%羊乳干预组肝脏PEPCK蛋白表达水平显著低于高脂饲料模型组(P<0.05)。高脂饲料模型组肝脏G6Pase蛋白表达水平显著高于空白对照组,经30%羊乳干预后G6Pase蛋白显著降低(P<0.05)。高脂饲料模型组的骨骼肌hexokinase2蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),经10%、30%羊乳干预后骨骼肌hexokinase2蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。(5)高脂饲料模型组的Lactobacillus、Olsenella属丰度显著低于空白对照组(P<0.05),但是,30%羊乳和30%牛乳干预后Lactobacillus、Olsenella属丰度显著增加(P<0.05)。和空白对照组相比,高脂饲料模型组的Bacteroides、Clostridium Xl Vb、Erysipelotrichaceae incertae sedis、Mucispirillum、Oxalobacter、Parabacteroides、Sutterella属丰度显著增加(P<0.05),但是,经10%、30%羊乳干预和30%牛乳干预后Bacteroides、Clostridium Xl Vb、Mucispirillum、Parabacteroides、Sutterella属丰度显著降低(P<0.05),经10%、30%羊乳干预后Erysipelotrichaceae incertae sedis属丰度显著降低(P<0.05),经10%羊乳干预后Oxalobacter属丰度也显著降低(P<0.05)。(6)与空白对照组相比,高脂饲料喂养大鼠结肠中的乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸水平均显著降低(P<0.05)。与高脂饲料模型组相比,10%羊乳干预组结肠中的乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸水平显著增加(P<0.05),30%羊乳干预组结肠中的异丁酸水平显著增加(P<0.05),30%牛乳干预组结肠中的丙酸水平显著增加(P<0.05)。与空白对照组相比,高脂饲料喂养大鼠肝门静脉血中的丙酸、丁酸水平均显著降低(P<0.05)。与高脂饲料模型组相比,10%羊乳干预组肝门静脉中的丁酸水平显著增加(P<0.05)。【结论】羊乳可改善STZ诱导的1型糖尿病血糖水平,亦可改善高脂膳食诱导的血糖紊乱。羊乳可能通过改善肠道菌群构成,增加短链脂肪酸水平,激活肝脏和骨骼肌中AMPK通路发挥改善血糖代谢的作用。