论文部分内容阅读
冠心病是人类健康的头号杀手之一,冠状动脉支架植入术已成为目前治疗冠心病最有效的手段之一,但术后6个月内发生再狭窄率仍有20%—30%,严重影响其远期疗效。冠通方是以中医理论为指导,在系统分析支架内再狭窄的病因病机的基础上,导师杨力强及一些专家组成的课题组根据多年的临床经验以及结合现代医学理论和有关药理学研究成果所创制。前期的临床研究表明,冠通方防治冠脉支架植入术后再狭窄有较好的临床疗效。 目的:通过冠通方及其拆方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响研究,证实冠通方配伍的合理性及探讨防治再狭窄的作用机理。为开发防治支架内再狭窄的有效中药制剂提供实验依据。 方法:选用大鼠血管平滑肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导其增殖,以冠通方及其拆方含药血清分别作用于大鼠血管平滑肌细胞,MTT比色法测定细胞的吸光度值,计算其增殖抑制率;用流式细胞术PI染色法检测各周期的DNA含量及细胞晚期凋亡的情况;用流式细胞术 ANNEXIN V-PE/7-AAD双染色法精确测算细胞各阶段凋亡情况。 结果: 1.MTT:模型组OD值与空白组相比明显升高(P<0.01),冠通方组、活血祛瘀组、益气养阴组、清热化痰组 OD值与模型组相比均显著降低(P<0.05),其48h的增殖抑制率分别为24.1%、22.8%、17.8%、14.1%。 2. PI染色:模型组与空白对照组相比,GO/G1期血管平滑肌细胞百分比明显减少(P<0.01),S期+G2/M期血管平滑肌细胞百分比明显增加(P<0.01),晚期凋亡率显著减少(P<0.01)。冠通方组、活血祛瘀组、益气养阴组、清热化痰组各药物组与模型组相比,G0/G1期血管平滑肌细胞百分比明显增加(P<0.05),S+G2/M期血管平滑肌细胞百分比明显减少(P<0.05),晚期凋亡率明显增加(P<0.05),48h的S期+G2/M期细胞总数百分比分别为29.8%、38.3%、42.7%、41.5%;晚期凋亡率分别为25.7%、24.4%、19.3%、16.1%。 3. ANNEXIN V-PE/7-AAD双染色:模型组与空白对照组相比,早期及晚期细胞凋亡率明显降低(P<0.01),与模型组相比,冠通方组、活血祛瘀组、益气养阴组、清热化痰组各药物组早期及晚期凋亡率均明显升高(P<0.05),48h的总凋亡细胞百分比分别为32.5%、26.7%、21.3%、17.4%。 结论: 1.冠通方防治ISR可能与抑制VSMC的增殖、影响其周期、诱导其凋亡有关。 2.冠通方抑制 VSMC的增殖主要在细胞周期的G0/G1期,并诱导VSMC发生早期及晚期凋亡,可能与抑制细胞DNA合成有关。 3.拆方研究表明,以全方组效果最好;各拆方组间的比较显示,以活血祛瘀拆方组效果最好,提示冠通方以活血化瘀功效为主。