背景:原发性肝癌是全世界范围内极其常见的消化系统恶性肿瘤,在肿瘤发病率排行中位列第五,其肿瘤相关死亡因素在恶性肿瘤中位列第三,且其发病率仍然呈不断上升的趋势。全球每年新发肝癌患者超过150万人,其中我国大约占到其中的一半。近年来肝癌的治疗方法已经发展为手术治疗为主,射频消融、介入治疗、化疗、放疗、基因靶向治疗为辅的综合性治疗方案,在一定程度上提高了肝癌治愈率。但肝癌在我国依然是仅次于肺癌的第二大肿瘤致死因素。其主要原因是肝癌起病隐匿,在确诊时大多数已经发展为中晚期,失去了最佳手术治疗机会。此外,肝癌的高度异质性导致其对常规放、化疗方案不敏感,以致肝癌术后极易复发。为了改善肝癌患者预后,提高疾病治愈率,临床上亟需寻找一个高效、稳定、副作用小的肝癌药物干预靶点。NF-κB是人体内关键的基因转录调控因子,在大多数情况下NF-κB与它的抑制因子IκB在胞质中结合处于无活性的状态。只有在其受到诸如射线、化学药品、病毒细菌、上游刺激因子等激活剂激活后才会与IκB相解离,暴露出结合桥,并穿过核膜进入核内指导细胞周期及DNA复制、转录等环节,从而控制细胞的增殖与凋亡。NF-κB在人体多数细胞中极少表达,且与抑制因子IκB结合后处于无活性状态。现有研究表明肿瘤细胞中NF-κB表达量较正常细胞高出数倍,这一点已经在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌等不同肿瘤中得到验证。在肝癌的研究中也得到了类似的结论,即在肝癌诱导的早期阶段,随着肿瘤的增殖进展,NF-κB表达量呈线性上升趋势,在肝细胞彻底癌变时达到高峰,之后一直处于高表达状态。许多实验表明人为地药物干预使肿瘤细胞中的NF-κB失活,可以大幅度地降低相关肿瘤标志物的含量,并且使肿瘤生长处于停滞状态,抑制肿瘤的侵袭转移。Toll样受体4信号通路是目前肿瘤学基础研究的焦点之一。近些年,越来越多的观点认为其不仅仅是识别传递细胞内信号的中介,而是参与了炎症发展、氧自由基产生及免疫诱导功能的重要信号通路,在恶性肿瘤的免疫逃逸机制中具有关键性的作用。My D88处于TLR4信号通路中的公共狭窄部分,起到了衔接上下游信号的关键作用。My D88的化学本质是一种可溶性蛋白质,在TLR4信号通路中起开关作用。在TLR4通路中,上游Toll样受体与My D88的Toll样区相结合,使My D88激活,并在白细胞介素1受体的辅助下启动下游信号的传导,促使IκB磷酸化并从NF-κB-IκB结合体中解离下来。最终导致NF-κB的异常激活,暴露出结合桥并转入细胞核内启动原癌基因的异常表达,诱导肝癌的发生。ST2825是Myd88的特异性抑制剂。实验证实ST2825能通过竞争性占据My D88的Toll样受体结合区从而抑制上游信号的传导及白介素1相关蛋白激酶的活性,进而沉默NF-κB的异常表达。ST2825不易被人体酶解系统所清除,从而具有天然存在的My D88抑制剂所不具备的优点。在抑制My D88活性方面具有高效、稳定等特点。在许多恶性肿瘤及炎症刺激、免疫诱导等方面已经被作为新的药物靶点来研究,取得了重要突破。但其在肝癌的预防及治疗研究中还未见详实的报道。基于以上理论,我们有理由建立这样的假设:ST2825能够干预人肝癌的发生、发展、侵袭和转移,抑制肝癌常规发展进程,提高肝癌患者生存率。本课题从在体与离体两个角度进行实验,以期发现新的高效干预肝癌进展的药物作用靶点。目的:1.明确Myd88在肝癌及癌旁组织中的表达情况。2.明确应用ST2825后肝癌细胞的增殖凋亡情况及裸鼠移植瘤的生长情况。方法:1.以免疫组化、RT-PCR法检测肝癌及其癌旁组织标本中My D88基因的表达情况并分析My D88在肝癌组织中的表达是否显著高于癌旁组织。2.RT-PCR及Western blot法探讨不同浓度ST2825作用下人肝癌细胞My D88基因的表达变化情况。3.流式细胞学技术、MTT法及Western blot法检测ST2825作用后人肝癌细胞的增殖及凋亡变化情况。4.在体检测ST2825作用后对人肝癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制情况。结果:1.免疫组化法结果显示My D88基因在肝癌中的表达显著高于癌旁组织,RT-PCR结果显示My D88 m RNA在肝癌中的表达显著高于癌旁组织。2.RT-PCR及Western blot法结果显示在不同浓度ST2825作用后人肝癌细胞My D88基因的表达有不同程度的降低,且ST2825浓度越高,My D88表达越低,均具有统计学意义。3.流式细胞学检测结果显示,应用ST2825后人肝癌细胞早期凋亡比例明显增高,且GO/G1期细胞比例明显升高。4.应用ST2825后人肝癌细胞中凋亡相关蛋白caspase-3表达显著升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低。增殖相关蛋白cyclin D1、P65表达显著降低,I?B表达显著升高。5.MTT法检测结果显示应用ST2825后人肝癌细胞活性呈剂量依赖性显著降低。6.在体实验结果显示应用ST2825可抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:1.My D88在肝癌组织中的表达较癌旁组织明显升高,差异具有统计学意义。2.应用ST2825后人肝癌Hep G-2细胞的增殖受抑制且早期凋亡受促进,差异均具有统计学意义。3.ST2825能够明显抑制裸鼠人肝癌移植瘤的生长,其抑制效果呈剂量依赖性。