目的:人类调控复合物MED由28个亚基组成,MED27是基中的一个,其在人体中广泛表达,是转录起始阶段普遍需要的酶。MED27被发现与甲状腺激素受体相互作用并通过与其它转录因子和辅因子结合一起行使甲状腺激素受体功能。此外,新的研究结果证明了它参与HIV-1的转录过程。MED27蛋白的敲低,与其他MED蛋白质的敲低相结合,能够显著削弱病毒复制,但是不影响细胞的生存力。尽管如此,迄今为止,与MED家族的其它成员相比,MED27在人类疾病中的功能作用仍然很少报道,特别是其在肿瘤发生和发展中的功能更是知之甚少。前期研究中,我们基于si RNA文库筛选出一系列影响黑色素瘤生长的关键基因,发现其中之一为MED27。本论文拟在此基础上,进一步研究MED27在黑色素瘤发生发展中的功能和具体的分子机制,从而为黑色素瘤的诊断和治疗提供新靶标。方法:(1)以si RNA library screen文库为实验新技术,寻找影响黑色素瘤细胞生长的潜在靶基因。(2)应用基因转染技术来过表达或敲低MED27的表达,通过体外实验研究其对细胞增殖、迁移、周期、凋亡等生物学功能的影响,以及相关分子信号通路的变化。(3)应用免疫印迹、免疫组化等技术检测人肿瘤细胞和正常细胞以及组织芯片标本中MED27的表达水平,并结合细胞特性和临床资料分析MED27的肿瘤特异性表达和它们在预测预后上的价值。(4)应用免疫共沉淀技术检测MED27与转录共活化子p65,p300的相互作用,以及对i NOS表达的影响。(5)建立黑色素瘤裸鼠动物模型,进一步验证MED27对肿瘤生长以及对i NOS表达的影响。结果:(1)在本实验中,我们通过si RNA library筛选鉴定出MED27基因,发现其能够影响黑色素瘤细胞的生长。(2)MED27在黑色素瘤细胞和组织中高表达。(3)MED27过表达或敲低表达可以相应地促进或抑制黑色素瘤细胞的增殖。(4)MED27过表达或敲低表达可以相应地活化或抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路。(5)MED27敲低表达诱导细胞周期阻滞和抑制黑色素瘤细胞迁移。(6)MED27敲低表达上调Bax蛋白/细胞色素C/半光天冬酶的信号转导通路,促进细胞凋亡。(7)MED27通过NF-κB信号通路影响i NOS的表达。(8)MED27敲低表达抑制小鼠模型中黑色素瘤的增长。结论:临床资料分析表明MED27高表达与黑色素瘤病人预后存在负相关性;体外实验分析发现抑制MED27的表达可以通过失活PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路抑制细胞的增值,导致细胞周期阻滞,并通过活化cytochrome C/caspase信号通路促进黑色素瘤细胞的凋亡。同时我们的研究发现,MED27通过靶向NF-κB信号通路可以正向调控炎症因子i NOS的表达。动物模型进一步验证了上述结论。总之,我们的实验研究为黑色素瘤的治疗提供了新靶点,并为寻找其它肿瘤治疗靶点提供了新思路。