在免疫学研究领域中免疫调节研究占据了其中重要的部分，调节性细胞对于免疫平衡和自身稳定的维持具有重要作用。传统上人们认为B细胞在免疫系统中发挥正向免疫调节作用，然而最近研究发现B细胞也具有负向免疫调节功能。1996年，Janeway等首次在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中发现了具有抑制功能的B细胞的存在，1997年Bhan等在慢性结肠炎中发现B细胞能抑制T细胞介导的炎症反应，并首次提出“调节性B细胞”的概念。随后又有研究者在多种自身免疫性疾病和炎症性疾病的小鼠模型中及在变态反应、肿瘤免疫、抗感染免疫中都证实B细胞具有负向免疫调节功能。2008年Tedder研究组首次在小鼠脾脏中鉴定出发挥负向免疫调节功能的B细胞亚群，其表型为CD19⁺CD5⁺CD1d^hi，主要通过分泌IL-10来发挥负向免疫调节作用，并将其称为B10细胞。通过小鼠实验发现B10细胞的存在和功能后，人们进一步研究发现人类体内也存在B10细胞。2009年Blair等在系统性红斑狼疮患者体内发现了调节性B细胞亚群的存在，其表型为CD19⁺CD24^hiCD38^hi，并发现同小鼠调节性B细胞一样其负向免疫调节功能依赖于IL-10。2010年Yohei Iwata等在自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、干燥综合征、自身免疫性疱病及多发性硬化中发现调节性B细胞的存在，其负向免疫调节功能的发挥依赖于IL-10。银屑病是在一定的遗传背景与环境因素相互作用下由Th1/Th17异常活化介导的自身免疫性疾病，负向免疫调节功能障碍在其发病过程中发挥重要作用，但其确切的细胞和分子机制尚不明确。银屑病发病过程不仅存在CD4⁺CD25⁺Treg数量和功能异常而且伴有IL-10水平的变化。小鼠研究发现B细胞能够影响Treg的发育和功能，调节性B细胞的部分负向免疫调节功能是通过CD4⁺CD25⁺Treg实现的。这些均提示着调节性B细胞可能参与了银屑病的发病并发挥着重要的负向调控作用。本研究比较分析了银屑病患者外周血调节性B细胞的数量、表型及功能，对调节性B细胞在银屑病发病中的可能作用进行了初步的分析。主要研究内容和结果如下：1.银屑病患者外周血B10细胞分析：收集银屑病患者外周血，分离PBMC，给予CpG+CD40L刺激，并加入PIB（P为PMA，I为离子霉素，B为BrefeldinASolution，前两者刺激细胞因子合成，后者抑制细胞因子分泌），进行5h培养，收集细胞，标记CD19及胞内IL-10，以流式细胞仪检测分析。结果发现：银屑病患者外周血IL-10⁺B细胞比例均数降低，但整体与正常对照间无统计学差异。2.银屑病患者外周血B10前体细胞分析：收集患者外周血，分离PBMC，加入CpG+CD40L刺激，并加入PIB，进行48h培养，收集细胞，标记CD19及胞内IL-10，以流式细胞仪检测分析。结果发现：银屑病患者外周血IL-10⁺B细胞比例与正常对照相比明显升高，表明B10前体细胞数量增多。3.银屑病患者外周血B10细胞分化能力分析：对比分析银屑病患者与正常人外周血在不同刺激条件下培养48小时后的B10细胞比例，结果发现银屑病患者外周血在体外刺激培养条件下产生的B10细胞占B细胞总数的比例与正常人比较没有差异，表明B10细胞体外刺激条件下不存在分化障碍。4.治疗后银屑病患者外周血B10前体细胞比例分析：收集同一患者治疗前后外周血，分离PBMC，同上四组刺激后收集细胞标记CD19及胞内IL-10，以流式细胞仪检测分析。结果发现治疗后银屑病患者外周血B10前体细胞数明显低于治疗前。5.银屑病患者B10细胞表型分析：收集银屑病患者及正常人外周血，分离PBMC，同上四组刺激后收集细胞标记CD19、CD38、CD24。以流式细胞仪检测分析，结果发现在PIB基础刺激或者CD40L及CpG单独刺激时分泌IL10的B细胞主要位于CD24^hiCD38low或CD24^hiCD38^-区域，而在PIB+CD40L+CpG时B细胞所分泌IL10增加且主要位于CD24^hiCD38^hi区域。6.银屑病患者外周血B10细胞功能分析：收集银屑病患者及正常人外周血，分离PBMC，表面标记CD19、CD38、CD24。流式细胞仪分选CD19⁺CD24^hiCD38^hiB细胞及除外CD19⁺CD24^hiCD38^hiB细胞的其他细胞。将含有CD19⁺CD24^hiCD38^hiB细胞和不含有CD19⁺CD24^hiCD38^hiB细胞的PBMC分别置于预先包被抗CD3抗体的24孔板培养72h，于最后6h加入P+I刺激，收集上清，ELISA检测IFN–γ和TNF-α。结果发现正常人CD19⁺CD24^hiCD38^hiB10细胞可以明显抑制T细胞分泌TNF-α，而患者B10细胞的抑制作用不明显。结论：本研究首次揭示了银屑病患者外周血B10细胞数目和功能异常，高度提示B10细胞在银屑病发病中发挥负向调控作用，其确切的作用和机制尚有待进一步研究。