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烟草病虫害种类繁多,传统判定方式具备周期长、进程庞大等缺点。检疫部门需要经常检验进出口烟叶是否携带危险性病虫害,如何改进检验技术和提高检验效率成为检疫部门亟待解决的问题。本研究利用分子方法检验了7种重要烟草病虫,包括2种烟草病原真菌、2种烟草病原细菌、1种烟草病毒和2种烟叶仓储期害虫,为烟叶进出口病虫害快速检验检疫提供技术支持。1 Colletotrichum nicotianae和Alternaria alternata的分子鉴定和检测通过烟草炭疽病菌rDNA核苷酸序列,比对核苷酸序列后设计出特异性引物进行PCR扩增,分别以烟草炭疽菌(C.nicotiana)、苹果炭疽菌、梨炭疽菌(Pear Anthracnose)、黑线炭疽菌(Cdenatium)、草莓炭疽菌(Colletotrichum fragariae Brooks)、瓜蒌炭疽菌(trichosanthes kirilowi anthracnose pathogen)和麦冬炭疽菌(dwarf lilyturf tuber)不同炭疽菌株为模板,只有烟草炭疽菌DNA中能够扩增出一条亮带;分别以8个分离自烟草的菌株DNA为pcr模板,只能够从烟草炭疽病菌DNA中扩增出一条亮带。通过对比测序所得到的烟草赤星病菌r DNA核苷酸序列,对比保守区差异核苷酸序列设计特异性引物进行pcr扩增,分别以8个分离自烟草的菌株DNA为pcr模板,只能够从烟草炭疽病菌DNA中扩增出一条亮带。2 Pseudomonas syringae和Ralstonia solanacearum的分子鉴定和检测对较测序得到的烟草野火菌r DNA核苷酸序列,对较保守区差异核苷酸序列后设计特异性引物进行pcr扩增,以烟草野火病菌和烟草青枯病菌DNA为pcr模版,只能从烟草野火病菌DNA中扩增一条亮带。比较得到的烟草青枯菌的r DNA核苷酸序列,比较保守区核苷酸序列后设计引物进行pcr扩增,以烟草青枯病菌和烟草野火病菌DNA为pcr模版,仅能从烟草野火病菌DNA中扩增一条亮带。3 TMV的分子检测比对烟草花叶病毒(TMV)cp基因核苷酸序列,设计特异性引物进行PCR扩增,从新鲜烟叶、干枯的烟叶病残体以及初烤烟叶中均能扩增出TMV cp基因。4 Phestia elutell和Lasioderma serricorne的分子鉴定和检测根据烟草粉螟COI基因核苷酸序列,设计特异性引物,进行PCR扩增,从烟草粉螟的卵、幼虫、蛹、成虫4种虫态的DNA中均能扩增出特异性条带。根据烟草甲COI基因核苷酸序列,设计特异性引物,进行PCR扩增,从烟草甲的卵、幼虫、蛹、成虫4种虫态的DNA中均能扩增出特异性条带。