背景:随着全球气温上升,空调的普遍使用为尘螨（House dust mites,HDM）生长和繁殖提供了适当条件;同时由于城市化进程加快,人们在室内活动时间延长,导致HDM致敏率显著上升。由尘螨引起的过敏性鼻炎,过敏性哮喘,过敏性结膜炎,过敏性的皮疹,过敏性荨麻疹,过敏性结膜炎等过敏性疾病发病率随之增高。以过敏性哮喘为例,有近80%的哮喘患者对尘螨过敏[1]。目前,对尘螨过敏的研究多集中于发现过敏原并探索其致敏机制,而除现已发现的过敏原外,尘螨中还含有大量非过敏原。在课题组之前研究中发现,尘螨Pplase蛋白可协同诱导过敏性哮喘,而尘螨蛋白二硫化物异构酶（Protein disulfide isomerase,PDI）作为新发现的一种非过敏原,其是否与过敏原协同参与过敏性哮喘,以及在过敏性哮喘中PDI是何调控机制尚不明确。目的:克隆表达粉尘螨PDI蛋白并鉴定其免疫原性,同时探讨其在过敏性哮喘中的作用机制。方法:⑴通过基因工程技术合成粉尘螨PDI基因,构建大肠杆菌重组质粒pET32a（+）-PDI-Origami,通过Ni2+亲和层析纯化得到重组蛋白r-PDI;⑵利用免疫印迹（WB）、间接酶联免疫吸附实验（ELISA）、临床的皮肤点刺测试（SPT）检测重组蛋白r-PDI的免疫原性;⑶分别以粉尘螨半胱氨酸蛋白酶（Dermatophagoides farina Cysteine protease,Der f1）、卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）为主要过敏原构建PDI与过敏原协同致敏的过敏性哮喘模型,探究PDI在哮喘中所起的作用;⑷通过细胞及动物实验探讨PDI蛋白在与过敏原协同作用时的调控机制。结果:⑴克隆表达纯化重组PDI蛋白,SDS-PAGE显示r-PDI蛋白分子量为74KDa;⑵临床点刺实验（SPT）显示,在30名尘螨过敏患者中无PDI阳性反应;ELISA检测显示,在35名尘螨过敏患者中,4名患者呈现PDI特异性IgE阳性,阳性率为12%;WB检测显示,在9名尘螨过敏患者中,1名患者呈PDI特异性IgE阳性,阳性率为11%;依据WHO过敏原命名要求,PDI为尘螨非过敏原;⑶PDI在分别与过敏原Der f1或OVA协同作用时,可使过敏原诱导的血清特异性IgE降低,Th2型炎性细胞因子表达降低,嗜酸性粒细胞数降低,肺部病理变化减轻,进而负调控过敏性哮喘;⑷体外实验表明,PDI能诱导DC分化为CD103+DCreg,高表达协同刺激分子CD80,分泌大量IL10,进一步引起T细胞表面CTLA-4高表达,竞争性抑制CD28活化,并诱导T细胞极化为Treg,对过敏原引起的炎性反应产生负调控。结论:PDI是粉尘螨非过敏原,其在与过敏原协同作用时,对过敏原引起的过敏性哮喘炎性反应起到负调控作用。