莱茵衣藻是具有两条等长纤毛的一种单细胞真核藻类,是研究纤毛的组装、解聚与功能的模式生物。纤毛是一种细胞天线,负责胞外信息向胞内的传递,其组装与维持依靠纤毛内运输(IFT)机制。纤毛在结构或功能上的缺陷会导致在人体统称为"纤毛病"的遗传性疾病,如肥胖症、糖尿病、先天性心脏病、多囊肾病等。然而,目前人们对调控纤毛内运送的机制知之甚少。纤毛内运送蛋白IFT46是IFT复合物B的一个重要组分,它在不同的物种中都是高度保守的,且在纤毛内运输、纤毛的组装与解聚中均发挥着重要作用。为深入研究其功能,蛋白质水平和分子水平上的研究是必需的,因此本实验通过制备高效价和高特异性的IFT46抗体为后续研究奠定基础。本研究利用ift46基因全序列分别构建了带有GST和MBP标签的原核表达载体pGEX-2T-IFT46 和 pMAL-c2X-IFT46,通过转化大肠杆菌 BL21(DE3)菌株并用 IPTG诱导表达,以15%SDS-PAGE鉴定,分别获得分子量为70、86kDa的表达ITF46的重组蛋白。将纯化的GST-IFT46融合蛋白(纯度95%以上)免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血液并分离血清进行抗体纯化及活性鉴定。间接ELISA测定结果表明抗血清效价大于1:256000,进一步将抗血清依次经过Protein A、MBP-IFT46和硝酸纤维素膜三步亲和纯化,获得了高特异性和灵敏度的多克隆抗体。用Western blotting和免疫荧光法检测结果显示,制备的多克隆抗体能够很好的识别莱茵衣藻中IFT46蛋白,而且发现IFT46蛋白绝大部分定位在基体,极少部分沿纤毛呈点状分布,为继续开展IFT46在肥胖症、糖尿病、多囊肾病等纤毛相关疾病中作用机制的研究奠定了重要基础。