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本研究旨在进一步探索ESC和骨髓MSC分化为肝细胞的体外诱导/筛选体系,并观察其形态学变化,标记性蛋白和肝细胞功能的表达.第2章胚胎干细胞定向分化为肝系细胞的体外研究目的:研究不同分化诱导体系对ESC定向分化为肝细胞的作用.方法:小鼠ESC悬浮培养5-7d发育成拟胚体,在自主分化、肝细胞生长因子(HGF)诱导或5﹪大鼠淤胆血清+HGF诱导体系中分化.观察分化细胞的形态学变化,内胚层或肝胆抗原(AFP、ALB、CK18和CK19)表达,并比较不同分化细胞的糖原、白蛋白、甘油三酯及尿素氮的合成,以及细胞吲哚氰绿(ICG)和荧光二乙酯(FDA)染色情况.结论:ESC体外自主分化中止于早期内胚层.HGF诱导ESC定向分化为肝系细胞的效力有限,并促进其向中胚层分化.引入淤胆血清的诱导体系可以抑制ESC向其它胚层分化,高度定向诱导/筛选ESC分化为肝系细胞.第3章骨髓间质干细胞横向分化为肝系细胞的体外研究目的:研究不同的体外分化诱导体系对骨髓MSC横向分化为肝细胞的作用.方法:经扩增4-6代的SD大鼠骨髓MSC分别在自主分化、HGF或5﹪大鼠淤胆血清+HGF诱导系统中培养.观察MSC在不同分化系统中的分化情况,检测细胞抗原AFP、ALB、CK18和CK19表达,分化细胞的葡萄糖、蛋白质(白蛋白)、甘油三酯、尿素氮的合成功能,细胞ICG和FDA染色,安定转化.同时检测1-14d不同时间点淤胆血清+HGF体系诱导细胞肝特异蛋白mRNA的表达情况(RT-PCR).结论:骨髓MSC自主分化为骨髓间质细胞.HGF促进MSC向肝系细胞和心肌细胞分化.引入淤胆血清的诱导体系可以抑制MSC向心肌分化,利于诱导/筛选骨髓MSC横向分化为肝系细胞.