ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌细胞系生长的影响及提高5-Fu疗效的研究

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该研究以人胃腺癌细胞系作为研究对象,观察ω-3PUFA对体外培养胃癌细胞和裸鼠人胃癌移植瘤生长的影响以及联合5-氟尿嘧啶(5-FU)的肿瘤杀伤效果,并探讨其作用机理.第1章ω-3PUFA对人胃癌细胞系增殖与凋亡的影响及联合5-FU的细胞杀伤作用.目的:观察ω-3PUFA对胃癌细胞增殖和凋亡的影响以及与化疗药物5-FU联合应用的细胞杀伤效应,并探讨其作用机制.方法:人胃腺癌细胞系SGC-790l、MGC-803和人成纤维细胞系HLF常规培养于含10%新生牛血清、100IU/ml青霉素和100IU/ml链霉素的RPMI 1640培养基(pH 7.2)中.以10~40μg/ml的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)作用于三种细胞12~72小时.采用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT分析)、细胞形态学观察、片断DNA凝胶电泳和流式细胞技术分析细胞增殖、细胞周期与凋亡;硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量;利用荧光探针rhodamine 123测定胃癌细胞线粒体跨膜电位(△ψmt);分离细胞线粒体与胞浆成分,酶联免疫吸附实验分析线粒体和胞浆中细胞色素C的水平;提取细胞线粒体膜磷脂,毛细管气相色谱法分析线粒体膜磷脂的组成:荧光光谱法测定caspase-3活性;5-FU联合20μ∥ml EPA或DHA作用SGC-7901细胞72小时,MTT法分析细胞存活力,计算5-FU的半数抑制浓度(IC<,50>).结论:ω-3PUFA能选择性抑制人胃癌细胞系的增殖,诱导胃癌细胞发生凋亡,这些作用可能是通过ω-3PUFA增加脂质过氧化产物、阻滞细胞周期于G<,0>-G<,1>期、改变线粒体膜构成和功能、随后开启线粒体介导细胞内在凋亡通路来实现的.此外,ω-3PUFAs可以增强化疗药物5-FU对胃癌细胞的杀伤效应.ω-3PUFAs有望成为一种新的胃癌预防和辅助化疗手段.第2章鱼油对人胃腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及联合5-FU化疗的实验研究.目的:初步观察单用不同剂量鱼油和联合化疗药物5-FU对人胃腺癌裸鼠移植瘤的治疗效果.方法:取0.2ml(2×10<6>)SGC-7901胃癌细胞悬液注入裸小鼠右侧后肢根部皮下,成功建立裸小鼠人胃腺癌皮下移植瘤模型.24只荷瘤裸鼠随机分为5组:①对照组(4只):0.2ml橄榄油灌胃,每天1次;②低剂量鱼油组(5只):0.1ml鱼油+0.1ml橄榄油灌胃,每天1次;③高剂量鱼油组(5只):0.2ml鱼油灌胃,每天1次;④5-FU化疗组(5只):30mg/kg体重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml橄榄油灌胃,每天1次;⑤鱼油+5-FU化疗组(5只):30mg/kg体重5-FU腹腔注射,每周3次×4周,0.2ml鱼油灌胃,每天1次.每4天测量移植瘤的长径(A)、短径(B),根据公式:肿瘤体积(Ⅴ)=0.4×AB<2>计算肿瘤的近似体积,绘制肿瘤生长曲线.观察动物的生活状态、体重改变及存活情况.实验结束时,瘤体称重,取肿瘤组织及化疗组小肠、胃、十二指肠、肝脏常规HE染色,光学显微镜下观察.对照组和化疗组进行外周血白细胞计数.结论:高剂量鱼油对裸鼠人胃癌移植瘤的生长有一定的抑制作用,联合鱼油化疗组后期的肿瘤抑制作用好于单用5-FU组,鱼油中富含的ω-3PUFAs对5-FU化疗引起的肠粘膜损伤具有保护作用.
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