止颤汤对帕金森病模型大鼠脑内移植神经干细胞存活及定向分化作用的研究

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帕金森病(PD)是一种常见的黑质内多巴胺(DA)能神经元进行性丧失所导致的中枢神经系统变性性疾病。目前应用左旋多巴(Levodopa,L-dopa,LD)或多巴胺激动剂的替代疗法仍是帕森病的主要治疗措施,但长期应用可引起疗效减退以及出现诸多并发症。而神经干细胞(NSC)移植技术是一种较有可能从根本上治疗帕金森病的方法,目前面临的主要问题之一是如何促使NSC移植后存活并分化为更多的多巴胺能神经元,以实现多巴胺神经元损伤的修复,成为令人关注的焦点之一,该问题解决将为NSC移植治疗PD带来突破性进展。中医中药经临床观察对改善PD病人症状,稳定人体内环境以及神经保护方面具有一定作用。现就治疗帕金森病的中药止颤汤对PD模型大鼠神经干细胞移植后神经元分化和存活情况进行观察研究。   目的:观察止颤汤对移植入帕金森病大鼠脑内的NSC的增殖及向多巴胺能神经元分化的作用,以及对分化相关因子的影响。   方法:体外培养神经干细胞并用GFP标记,实验动物分为四组,正常组及模型组用生理盐水灌胃,同时脑内移植普通培养基,对照组脑内移植神经干细胞,生理盐水灌胃,中药组脑内移植神经干细胞,用止颤汤灌胃。分别在处理后7天、14天、28天处死大鼠。观察动物行为学评分,比较各组GFP数量,同时免疫组化法检测TH蛋白表达,RT-PCR法检测脑内NSC分化相关因子Ptx3、Nurr1、Shh等的表达。   结果:和其他对照组比较,中药组对NSC移植后PD大鼠的行为学评分有显著改善,中药组GFP、TH蛋白表达有所增加,但并不显著;对Ptx3、Shh等mRNA的表达有显著提高,而对Nurr1mRNA的表达无明显差异。   结论:本研究止颤汤对帕金森病大鼠细胞移植治疗中神经干细胞定向分化显示出一定作用:1)中药组TH蛋白表达略高于西药对照组,说明有诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用。2)中药组神经干细胞向多巴胺能神经元分化的相关因子Shh、Ptx3基因表达有一定作用,Nurr1的表达未显示出差异。说明止颤汤可以改善神经干细胞分化相关因子,对改善神经干细胞分化的微环境有一定作用。3)中药组实验动物行为学评分均较对照组有改善,可以看出中药对神经干细胞移植治疗PD有一定促进作用,但也有可能是中药本身治疗PD的作用。结果提示中药对神经干细胞的定向分化以及促进移植的效果方面有一定作用。
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