本文以表达植酸酶的重组毕赤酵母为模型体系,研究了重组毕赤酵母高密度培养的条件,筛选了一种廉价的工业化培养基,并对其进行了优化;对此重组毕赤酵母表达体系表达分泌植酸酶蛋白的条件、营养条件对其生长及外源基因表达水平的影响进行了研究;进而在5L发酵罐放大培养中研究了重组毕赤酵母高密度培养的条件;最后对植酸酶酶活测定方法进行了初步研究。本论文首先对毕赤酵母的高密度培养的摇瓶培养基进行了筛选,没有以传统的甘油为碳源,而是选取了价格相对较低的葡萄糖作为高密度培养的碳源,以工业化的浓氨水作为氮源,氨水以补料的形式加入;并对培养基的其它组份进行了研究。通过单因素和正交优化实验,得到经济适用、易于扩大培养重组菌的培养基配方:即葡萄糖浓度为5%、氨水单次补料量20μL、KH₂PO₄浓度为0.7%、MgSO₄·7H₂O 0.03%、FeSO₄·7H₂O 0.05%、MnSO₄·H₂O 0.05%。对毕赤酵母在此摇瓶培养基上的培养条件进行了优化,得到高密度培养的最佳条件为:选取YPD为种子培养基,种子液最佳培养时间为24h;培养基最适初始pH为5.5;最佳接种量为10%;最佳摇瓶装液量为250mL三角瓶装20mL培养基,摇床转速为220r/m;最佳培养温度为30℃。在此优化的培养条件下,培养64h细胞干重最高可以达到15g/L左右。本论文接着对产植酸酶的毕赤酵母基因工程菌的表达条件进行了优化,确立了最佳的诱导表达条件:植酸酶的最佳收获时间为3d;甲醇的最佳诱导浓度为10g/L;重组酵母生长的最佳pH在5.5左右,而诱导表达植酸酶的最佳pH却在6.0左右。最后研究了添加不同外加营养物对植酸酶表达的影响,结果表明:在诱导开始之后加入0.4%的PTM1和0.1%酪蛋白水解物可以明显促进植酸酶的表达。在以上研究的基础之上,本论文对此毕赤酵母进行了5L发酵罐放大培养实验。通过5L发酵罐分批培养优化,大大降低了基础培养基中的磷酸盐浓度,而对毕赤酵母的生长却未有明显影响。考察了溶氧对毕赤酵母高密度发酵的影响,结果显示,在整个过程中控制溶氧在20%以上有利于毕赤酵母的生长。确定了指数流加方式更有利于菌体的生长,并对指数流加方式进行了优化,确定了以下的流加发酵策略:在补料的前期设定比生长速率为0.20 h^-1,而在补料后期设定比生长速率为0.15 h^-1。此种流加策略很好地解决了补料进行到32h溶氧降为0的矛盾,提高了细胞的生产强度及细胞的平均产率。本论文最后对如何降低发酵液中的无机磷对植酸酶活力测定的干扰并进而提高植酸酶活力测定的准确性进行了初步研究。对诱导后的发酵液经离心去除菌体后,上清液在透析袋中透析2h可以得到去除无机磷的酶液,对其进行植酸酶活性测定,其测定结果稳定性较透析之前大大提高。对植酸酶活性的测定方法-钒钼法进行了初步研究,结果显示:钒钼法测磷的灵敏度为0.025mmol/L,线性范围为0.025-0.60mmol/L;为减小