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目的:1.通过临床样本检测高危HPV持续感染不同结局患者的宫颈及其局部免疫微环境中白介素6(IL-6)、白介素6受体(IL-6R)的表达;2.研究miR-200c甲基化程度与宫颈病变进展之间的关系;3.通过细胞模型研究miR-200c调控IL6表达影响宫颈癌变的分子机制。方法:收集宫颈高危人乳头瘤状病毒(high-risk Human Papilloma Virus,HRHPV)持续感染的不同结局(慢性炎无宫颈病变NSIL或低级别鳞状上皮内病变LSIL、高级别鳞状上皮内病变HSIL、宫颈癌CC)患者的宫颈脱落细胞以及宫颈活检组织,采用免疫组化方法检测各组组织标本中IL-6/IL-6R、p-STAT3表达;应用meth Primer和Pyro Mark Assay Design 2.0软件分别设计甲基化特异性PCR(MSP)引物和测序引物,将各组样本经亚硫酸氢盐修饰后采用MSP检测miR-200c基因的甲基化水平,计算甲基化率;应用焦磷酸测序技术对miR-200c上游启动子区域Cp G岛进行测序寻找超甲基化/去甲基化位点;以“IL6R”基因搜索c Bio Portal软件中“Cervix”数据库(TCGA,Pan Cancer Atlas),对目前已有的宫颈癌中有关IL-6R基因改变的研究数据进行分析。选用宫颈永生化细胞系Caski、Si Ha、ECT、C33A研究IL-6/IL-6R下游通路,向细胞系中瞬时转染miR-200c mimic及miR-200c NC后,qRT-PCR方法检测四种细胞系中miR-200c、IL-6、IL-6R、STAT3的m RNA表达水平,Western Blot方法检测这四种分子的蛋白水平表达,收集转染前、转染后6h、12h、24h、36h、48h、72h的培养基,ELISA检测IL-6分泌水平。结果:1.免疫组化显示随宫颈病变进展,IL-6/IL-6R表达逐渐增加;p-STAT3未见表达且无明显变化;2.在Gene Bank上查询到miR-200c位于12号染色体p13.31;Cp G岛预测显示在miR-200c编码基因起始位点前113-360bp位置有一个长度为248bp的Cp G岛;3.对高危HPV持续感染不同结局患者的宫颈脱落细胞DNA样本进行MSP检测,表明随着宫颈病变进展,miR-200c甲基化水平降低;4.qRT-PCR结果显示转染miR-200c mimic和miR-200c NC对照后,IL-6R的表达水平在Si Ha、Caski细胞系中显著上调;ECT细胞系变化不大;5.Western Blot和qRT-PCR实验结果中,过表达miR-200c mimic后IL-6R的蛋白和m RNA在ECT、Caski细胞系中表达显著上调,在Si Ha、C33A细胞系中下调;Elisa实验未成功检测到IL-6分泌变化;过表达miR-200C后STAT3在ECT、Si Ha、Caski细胞系中磷酸化水平明显增加,提示miR-200C促进STAT3活化,且在宫颈癌细胞系中p-STAT3表达明显高于HPV e6/e7细胞系(ECT);结论:1.IL-6/IL-6R表达随宫颈病变进展逐渐上调,表明宫颈局部免疫微环境中IL-6/IL-6R表达与宫颈病变严重程度正相关;2.miR-200C上游启动子区域Cp G岛甲基化水平与宫颈病变进展呈负相关,上调miR-200C的表达,可能在宫颈癌的发生发展中起积极作用;3.miR-200c上游启动子Cp G岛位于编码区域上游113-360bp位置;4.miR-200c促进HR-HPV持续感染不同结局的宫颈上皮细胞局部免疫微环境中STAT3活化,且STAT3活化通路是炎症反应依赖性的,非HPV感染宫颈癌中则可能不依赖此通路或处于抑制状态,miR-200c通过炎症因子IL-6/IL-6R诱导STAT3蛋白活化从而有利于宫颈病变进展;