从奶牛子宫粘液和奶牛子宫组织分离抗菌活性肽的工作在国内外尚未见报道。本研究以奶牛子宫内膜粘液和奶牛子宫内膜组织为研究对象,对其子宫粘液和子宫组织抗菌肽成分进行了提取、分离和纯化,并对水平电泳洗脱样品和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离的样品分别进行了琼脂糖弥散法抗菌活性检测。本试验共分两个部分:第一部分奶牛子宫粘液抗菌多肽的分离、纯化及抗菌活性分析新鲜奶牛子宫粘液经5%乙酸浸提,将酸溶性提取物进行制备性酸性尿素聚丙烯酞胺凝胶电泳(AU-PAGE),并用电泳琼脂糖弥散法检测其有一条抗菌条带,切下相应的抗菌条带进行洗脱电泳。洗脱物透析冻干后,经电泳琼脂糖弥散法检测对大肠杆菌BL-21、金黄色葡萄球菌26003具有抗菌活性。洗脱样品经RT—HPLC分离,在第45分钟保留时间纯化出单一分子,琼脂糖弥散法检测显示其对大肠杆菌BL21、金黄色葡萄球菌26003具有抗菌活性;Tricine-SDS-PAG电泳检测其分子量约为14kD左右的抗菌多肽。第二部分奶牛子宫组织抗菌多肽的分离、纯化及抗菌活性分析新鲜的奶牛子宫组织,经5%乙酸浸提,将酸溶性提取物进行制备性酸性尿素聚丙烯酞胺凝胶电泳(AU-PAGE),并用电泳琼脂糖弥散法检测其有两条抗菌条带,切下相应的抗菌条带进行洗脱电泳。洗脱物透析冻干后,经电泳琼脂糖弥散法检测对大肠杆菌BL-21、金黄色葡萄球菌26003、牛致病性大肠杆4605、绿脓杆菌10104具有抗菌活性。洗脱样品通过RT—HPLC分离,其中上条条带在第45分钟保留时间纯化出单一分子,该分子对大肠杆菌BL-21有较强的抑菌活性;而下条条带在第35、43、45分钟出峰时间分别纯化出单一成分,这三种分子对大肠杆菌BL-21也有较强的抑菌活性。Tricine-SDS-PAG电泳检测其分子量,结果表明,其中上条条带45min样品分子量约为14kD的抗菌多肽其分子量与奶牛子宫粘液分离纯化的分子量相似,说明其可能为同一物质;而下条条带在35min的样品分子量约为14—16kD的抗菌多肽,43min的分子量约为6kD的抗菌多肽,45min的分子量约为12kD的抗菌多肽。综上所述,我们利用电泳与RP-HPLC技术首次从奶牛子宫粘液和组织中分离到抗菌多肽,并对其分子大小、抗菌活性进行了分析,同时为今后进一步研究奶牛子宫内膜抗菌多肽的分子机制及高效原核、真核表达载体的构建奠定基础,并可获得将奶牛子宫内膜抗菌多肽开发为新一代抗感染药物所必须了解的信息。