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近10多年来，鸡球虫病的免疫预防研究越来越受到人们的重视。寻找免疫原性好的保护性抗原，是完成基因工程苗和核酸疫苗研究的前提。微管是球虫的一种重要的细胞器，在球虫入侵宿主细胞的过程中起着重要作用，本论文以E.acervulina的微管蛋白为研究对象，进行了如下试验： 1．E.acervulina α-微管蛋白基因的克隆 以E.acervulina BJ株孢子化卵囊总RNA为模板进行RT-PCR，按照Genebank上发表的α-微管蛋白基因的序列(Yamage M，1995)设计引物，上、下游引物分别加上BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ的酶切位点，扩增的PCR产物与pGEM-T载体连接后转化至JM109感受态细胞，蓝白斑筛选，将PCR和酶切鉴定正确的阳性质粒进行测序。结果表明，扩增产物大小为1955bp，与Yamage M(1995)在Genebank上登录的α-微管蛋白基因的同源性为97.4％。此基因现已作为E.acervulinaBJ株的α-微管蛋白基因登录到Genebank上，登录号是AY488134。 2．α-微管蛋白基因的表达及鉴定 重新设计表达引物，以阳性质粒为模板，克隆α-微管蛋白基因的阅读框，与pGEX-6P-1载体连接后转化至E.coli BL21(DE3)表达菌，用1.0mMIPTG诱导，SDS-PAGE电泳后发现在诱导后2h蛋白表达量即达到较高的水平，5h达到高峰，表达蛋白的分子量为69kDa，波层扫描分析表达蛋白占菌体蛋白的33％。用GST抗体进行Western-blot检测，成功检测到特异性条带。 3．α-微管蛋白真核表达载体(p-α-tubulin)的构建 将微管蛋白基因的ORF片段插入到真核表达载体pcDNA3.1中，构建成核酸疫苗pcDNA3.1-α-tubulin(p-α-tubulin)，经酶切和PCR鉴定为正确插入。 4．α-微管蛋白亚单位疫苗和核酸疫苗的免疫保护效果研究 核酸疫苗和亚单位疫苗分别设高(100μg)、中(50μg)、低(25μg)三个剂量组，同时设地克珠利药物组、活卵囊组、红对照组和空白对照组，在鸡只7日龄和14日龄分别进行免疫。一周后用12×10~4个E.acervulina BJ株孢子化卵囊进行攻虫，结果表明α-微管蛋白核酸疫苗中剂量(50μg)免疫时，则可使E.acervulina攻虫鸡的卵囊产量下降34.38％，肠道病变记分降低33.33％，同时鸡只增重效果明显，相对增重率为82.84％，ACI值为164，各指标优于核酸疫苗高剂量和低剂量免疫组。而亚单位疫苗各剂量组对E.acervulina攻虫鸡的效果低于核酸疫苗组。