牛病毒性腹泻病毒（BVDV），是世界范围内导致产生牛病毒性腹泻-粘膜病的瘟病毒属病原。BVDV基因组包括一个正的单链RNA，编码所有的结构蛋白和复制成分。基因组的前半部分翻译一个多聚体蛋白，并相应地加工成E₀（gp48）、E₁（gp25）、E₂（gp53）蛋白。在这些结构蛋白中，E₂蛋白被认为是与中和作用有关的囊膜蛋白。因此，对BVDV E₂基因进行克隆具有重要的生物学意义。 BVDV NADL株属于致细胞病变型毒株，用MDBK细胞培养增殖BVDV，经5-6次连续传代至出现明显的细胞病变。收集细胞培养液，并浓缩病毒。从GenBank中搜寻出Deer-N₂₁、SH9、NewYork-Ⅰ等CP型毒株的E₂基因序列，根据其同源性用生物学软件Primer 5设计引物，并在引物的两端加入Bal Ⅰ和Nco Ⅰ两个酶切位点，酶切位点的存在易于对E₂基因进行克隆操作。 在基因组RNA的提取和E₂基因的反转录过程中，所用试剂全用DEPC处理水配制。通过RT-PCR扩增E₂基因，电泳测定扩增片段的大小，经纯化后，连接于pUCm-T载体，获得重组质粒pBNE2PⅠ、pBNE2PⅡ，转化E·coli JM109，经蓝白斑筛选，挑取阳性克隆，提取质粒，直接电泳鉴定和酶切鉴定。通过对pBNE2PⅠ E₂基因的进一步基因序列和核苷酸序列分析，结果表明，E₂基因包括约1110个碱基，编码约370个氨基酸。 本实验通过引物设计及BVDV囊膜糖蛋白E₂基因的克隆，为E₂基因的进一步分子生物学分析及亚克隆奠定了的基础。