目的:衰老是很多疾病的高危因素,老龄化社会的发展使衰老相关疾病越来越受到关注。老化过程中,疼痛表现出极为复杂的特征,严重降低老年人生活质量,我们观察老年大鼠生理状态下基础痛阈以了解老年疼痛的基本特征。神经系统老化过程中神经元结构和功能变化的研究虽然获得一些进展,但老化疼痛的机制仍不清晰,亟待从新的角度探索老年疼痛的细胞分子机制。炎性衰老是老化重要特征之一,在自然衰老进程中机体呈现出促炎功能缓慢进行性增高现象。神经系统有相对独立的免疫细胞和免疫机制,血脑屏障严格控制着大分子进出,那么老化过程中中枢神经系统是否表现出与外周相似的慢性促炎症状态?小胶质细胞和星形胶质细胞是中枢神经系统的主要免疫细胞,两种类型细胞均参与脊髓水平疼痛信息的调制,这些细胞是否通过影响神经系统炎症状态进而参与老化疼痛?因此,本研究旨在探讨老年疼痛特征,明确老化过程中脊髓胶质细胞相关的可能的炎症机制,分析胶质细胞炎性老化与老年疼痛的关系。方法:1.实验分组雄性SD大鼠,年轻组:3月龄;老年组:20月龄。2.Von Frey机械痛阈检测用Von Frey纤维丝通过简化up-down法（simplified up-down method,SUDO）测量大鼠机械缩足反应阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）,以了解老化机械痛的基本特征。3.热痛缩足反射潜伏期（paw withdrawal latency,PWL）实验开始时,将聚焦光源对准脚掌正中区域,记录从光源开始照射到大鼠缩起脚掌的时间,即为大鼠热辐射缩足潜伏期的测量值,共测量5次取平均值,以了解老化热痛的基本特征。4.密度梯度离心法制备胶质细胞取大鼠脊髓组织制备细胞悬液,使用70%-50%-35% SIP Percoll从脊髓组织的单细胞悬液中分离纯化小胶质细胞与星形胶质细胞。5.免疫荧光染色应用免疫荧光染色观察大鼠脊髓背角小胶质细胞与星形胶质细胞的形态,并观察离体脊髓胶质细胞的形态和数量,验证密度梯度离心法分选出的细胞纯度。6.荧光定量PCR应用荧光定量PCR分别检测大鼠脊髓组织炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10和TGF-β的m RNA含量,以及检测纯化的脊髓胶质细胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-10、TGF-β mRNA的含量。7.台盼蓝染色单细胞悬液与台盼蓝9:1混匀,室温静置3 min后,用细胞计数板计数,10倍显微镜下观察。结果:1.老年鼠的基础痛行为特征生理状态下,老年组大鼠的机械基础痛阈值较年轻组大鼠高,而热基础痛阈较年轻组大鼠低。2.老年大鼠脊髓组织炎性状态老年大鼠脊髓组织促炎因子IL-1β、TNF-α与抗炎因子TGF-β表达增加,抗炎因子IL-10无明显变化。3.老年大鼠脊髓背角胶质细胞形态与年轻大鼠相比,老年大鼠脊髓背角小胶质细胞在形态上处于激活状态,细胞增多,胞体更为圆润饱满,突起也更粗更短;老年大鼠脊髓背角星形胶质细胞胞体肥大,突起同样变粗变短,也呈现出激活状态。4.急性分选脊髓组织胶质细胞经Percoll密度梯度离心法分选所得脊髓小胶质细胞与星形胶质细胞数量多、活性好、存活率高,可达95%以上,可自行贴壁生长,细胞纯度达85%以上,可用于后续实验观察细胞生物学特征。5.离体脊髓胶质细胞形态与年轻大鼠相比,老年大鼠离体脊髓小胶质细胞与星形胶质细胞在形态上偏向于一种激活状态,数目增多,胞体饱满,突起粗短。6.离体脊髓胶质细胞炎性状态与年轻大鼠相比,老年大鼠脊髓小胶质细胞促炎因子IL-1β、TNF-α表达下降,而抗炎因子IL-10表达增加,抗炎因子TGF-β无明显变化,表现为抗炎表型;老年大鼠脊髓星形胶质细胞促炎因子IL-1β、TNF-α表达增加,抗炎因子IL-10表达下降,抗炎因子TGF-β增加,整体表现为促炎表型。7.慢性CFA炎性痛行为特征老年大鼠与年轻大鼠的痛敏持续时间接近,但痛敏程度明显高于年轻大鼠。结论:老化过程中,老年大鼠基础痛阈表现出复杂的特征;老年大鼠脊髓组织促炎因子水平升高可能是基础阈值改变的原因;老年大鼠脊髓小胶质细胞表现出抗炎表型,星形胶质细胞主要表现为促炎表型;两种胶质细胞共同参与脊髓组织的炎性衰老,可能是老年疼痛改变的基础。