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背景:食管癌(esophageal cancer,EC)是常见的消化道恶性肿瘤,在我国食管鳞癌占90%以上,严重地威胁着人民的健康和生命。目前食管癌的有效治疗手段主要依赖早期手术,其5年生存率仍低于10%。食管癌的发病机制目前尚不清楚,既往的研究表明表观遗传在食管癌的发生过程中具有重要的作用。SOX17基因全称为性别决定区Y的盒内基因17(SRY-box containing gene17),是目前已知的发育相关基因,在爪蟾发育过程中SOX17具有抑制WNT信号通路的作用。我们以往的研究表明在结直肠癌和肝细胞癌中SOX17启动子区域频繁发生甲基化,而且甲基化灭活SOX17的表达可激活WNT信号通路,从而促进肿瘤的生长。SOX17在食管癌中的表观遗传学改变及其功能目前尚不清楚。目的:通过分析SOX17在食管癌变过程中的表观遗传学改变,探讨应用表观遗传学标志物作为食管癌早期诊断的可能性。通过研究表观遗传学对SOX17表达的调控,探索应用表观遗传学相关药物治疗食管癌的可能性。通过研究SOX17在食管癌细胞系中的功能及作用机制,为食管癌的分子靶向治疗奠定基础。通过研究microRNA对SOX17的调控作用,了解microRNA在食管癌发生中的作用。材料与方法:应用半定量RT-PCR方法在8株5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza-2’-deoxycytidine、5-aza-dc)处理前后的人食管癌细胞系检测SOX17mRNA水平的表达,包括SKGT4、YSE2、KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、KYSE180和KYSE450。应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测8株食管癌细胞系、9例正常人食管粘膜、60例食管不典型增生和169例原发性食管癌组织中SOX17基因启动子区的甲基化情况。应用SPSS13.0软件分析甲基化和食管癌患者相关因素的关系, P<0.05认为有统计学意义。应用免疫组织化学(IHC)方法检测39例配对的人原发性食管癌及癌旁组织中SOX17和β-catenin的表达情况。应用细胞转染、克隆形成实验、双荧光素酶报告实验和western blot等方法,在食管癌细胞系KYSE140中研究SOX17在食管癌中的功能及在WNT信号通路中的作用。应用TargetScan软件、双荧光素酶报告实验、western blot和实时定量PCR等方法,在食管癌细胞系YSE2中分析microRNA对SOX17的调控作用。结果:SOX17在SKGT4、KYSE30、KYSE140和KYSE150细胞中呈现完全甲基化;在KYSE70、KYSE180和KYSE450呈部分甲基化;而在YSE2细胞中为非甲基化。SOX17在食管癌细胞系YSE2中正常表达;在KYSE70、KYSE180和KYSE450中表达明显减低;在SKGT4、KYSE30、KYSE140和KYSE150中无表达。其表达和甲基化呈对应关系,即启动子区甲基化的细胞SOX17表达缺失或明显减低。去甲基化药物5-aza-dc处理上述8种细胞后,表达减低或不表达的食管癌细胞系恢复表达,而YSE2细胞处理前后表达无变化,表明SOX17的表达在食管癌中受表观遗传学调控。在169例食管癌组织中SOX17的甲基化率为65%(109/169例),而在正常食管粘膜中未见甲基化改变(0/9例)。在60例食管不典型增生组织中SOX17的甲基化率为42%(25/60例),表明SOX17启动子区甲基化是食管癌的频发事件,而且随着食管癌变进展呈现累积性改变。SOX17甲基化是一个潜在的食管癌早期诊断标志物。同时,我们发现SOX17甲基化与食管癌患者的饮酒史有关,而与其他因素如患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、分期、转移和分化等因素无关。在39例配对的人原发性食管癌和癌旁组织中,甲基化与SOX17的表达也呈现负相关。并且在SOX17甲基化的食管癌组织中,β-catenin在细胞核和细胞浆中的表达明显增加;而在SOX17非甲基化的癌旁食管组织中,β-catenin的表达主要分布在细胞膜。这一结果提示SOX17在食管原发癌中可能影响WNT信号通路的功能。在食管癌细胞系KYSE140中恢复SOX17的表达,克隆形成能力减低、TCF荧光素酶的活性减低、WNT信号通路下游蛋白cyclin D1的表达水平下降。这一结果提示,SOX17可能通过负性调控WNT信号通路而抑制食管癌的增殖。在YSE2细胞中转染miRNA-141导致SOX17表达减低,表明食管癌中SOX17受到miRNA的调控。以上研究结果为食管癌的分子靶向治疗奠定了理论基础。结论:SOX17在食管癌中频繁发生启动子区域甲基化,并且随着食管癌变进展呈现累积性改变,表明SOX17甲基化是一个潜在的食管癌早期诊断标志物。饮酒可能导致SOX17甲基化而促进食管癌的发生。在食管癌中SOX17的表达受甲基化和miRNA的调控。SOX17甲基化可能激活WNT信号通路而促进食管癌的发生,这一结果为食管癌的分子靶向治疗奠定了基础。