产纤溶酶植物乳杆菌的筛选及其纤溶酶酶学性质研究

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植物乳杆菌是一类具有多种益生功能的重要益生菌,纤溶酶可以溶解血栓中纤维蛋白,是治疗血栓性疾病药物的主要有效成分。从传统发酵食品中筛选出产纤溶酶的植物乳杆菌,研究其生物学特性及纤溶酶性质,具有重要的意义。本研究从豆豉等传统发酵食品中分离出一株产高活性纤溶酶的乳酸菌,对该菌株进行鉴定并研究其益生特性,对其所产纤溶酶酶学特性进行分析,主要研究结果如下:(1)采用脱脂乳平板初筛从豆豉等传统发酵食品中分离到7株产纤溶酶的菌株,通过纤维蛋白平板复筛方法,从中筛选出发酵上清液纤溶活性最高的菌株,命名为HQ-3,其发酵上清液酶活力为497.6 U/m L。根据形态学等鉴定,确定菌株HQ-3为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。并将其所产纤溶酶命名为LPF。(2)菌株HQ-3部分生物学特性研究结果表明:菌株HQ-3对亚胺培南等13种常见抗生素不同程度敏感,仅对青霉素具有耐药性;对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌三种致病菌具有一定抑菌能力,其抑菌圈直径分别17.5 mm、18.5 mm和20.2 mm;HQ-3对模拟肠胃道具有较好的耐受能力,经过不同p H梯度酸处理的人工模拟胃液中培养存活率达98.75%,后经人工肠液处理后存活率为72.92%,活菌数为107CFU/m L;HQ-325 h后自聚集率达到73.56%,与大肠杆菌及金黄色葡萄球菌共聚集25 h后聚集率分别为68.9、57.89%;将菌株分别在二甲苯、氯仿和乙酸乙酯三种试剂中培养,聚集率分别为47.52、45.91、27.55%;菌株HQ-3与酵母细胞黏附率为57.3%,经PCR检测到其含有黏附基因slp2588。(3)菌株HQ-3发酵上清液经盐析、透析、浓缩及超滤等方法进行粗蛋白提取,获得纤溶酶LPF浓缩粗酶液,活性电泳结果表明浓缩粗酶液中具有纤溶活性组分为1种。该粗酶液酶学特性结果表明:纤溶酶LPF以通过激活纤溶酶原来降解纤维蛋白,属于间接方式降解血栓;且该酶的最适反应温度为45℃,最适p H为3.0,Na+及Fe2+对纤溶酶LPF酶活有激活作用,K+、Ba2+、Cu2+对该纤溶酶具有轻微抑制作用;抑制剂胃酶抑制剂A能部分抑制纤溶酶LPF的活性。本研究分离筛选到一株产纤溶酶的新型植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HQ-3。研究该菌株的部分益生特性;并对其所产纤溶酶LPF进行初步纯化和基础酶学性质研究;以期为产纤溶酶的潜在益生菌在食品等行业应用提供参考。
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