一直以来，核受体超家族（Nucleic Receptor Superfamily）在生物体内基因表达调控中占据着统治地位，它们几乎参与了人体所有组织和器官的功能调节，在肿瘤、免疫应答、炎症反应、糖尿病、阿尔茨海默病以及心血管疾病等的发生发展中发挥着重要作用。雌激素受体（Estrogen Receptor，ER）作为核受体超家族的一员，是典型的配体依赖的转录调节因子：其与扩散进入细胞核的雌激素结合后，发生异构形成二聚体，二聚化的复合物高度亲和雌激素应答元件ERE，引发基因调控机制，调节下游基因的转录。若将雌激素应答元件ERE装配在报告基因的启动子区域构建报告基因载体，其与雌激素受体表达载体共同整合到微生物体内，可构建受雌激素诱导的靶基因表达调控系统，实现目的基因表达的定向调控。本研究为利用外源性小分子化合物定向调控基因的表达提供了一种参考模式和方法，也可为雌激素类似物的检测提供一种生物检测系统。毕赤酵母（Pichia.pastoris）是目前常用的真核表达系统，其菌体内无天然质粒，因此表达载体需与宿主染色体发生同源重组。将外源基因表达框包括启动子、调控元件等一同整合于染色体中以实现外源基因的表达。如此，既可以避免载体质粒的丢失，同时又能保证外源基因的表达完全受载体自带的启动子和调控元件调控。基于此，本课题构建了以雌激素为诱导剂，ER介导的，能在毕赤酵母中调控转录的基因表达调控系统。本文首先从人乳腺癌MCF-7细胞中提取总RNA，通过RT-PCR的方法得到cDNA，设计PCR引物，将ER全基因分为三段，以重叠PCR的方式将三段PCR产物连接获得hER基因全长序列。凝胶电泳实验显示通过重叠PCR获取的hER大小等基本信息正确，序列测定进一步证实完全正确。随后，本文将hER基因插入毕赤酵母常用载体pPIC9中，将ERE和报告基因EGFP分别克隆进pPIC9K中，构建hER表达载体和报告基因质粒。通过测序可知：两质粒分别构建成功，同时测序报告显示hER基因序列、ERE序列和EGFP序列无误。最后，分别将两质粒电转化至巴斯德毕赤酵母GS115宿主菌中，待酵母基因重新整合后，分别用甲醇和17β—雌二醇进行诱导表达。结果显示：未诱导时，报告基因不表达，荧光强度为1.48光强度/像素；当17β—雌二醇浓度为10-7mol时，24h内荧光的表达量逐渐增强，最高可达206.92光强度/像素。