rhINFα-2b是现今制备技术较为成熟的干扰素商品。和大多数蛋白质药物一样,IFNα-2b的血清半衰期相对较短(2~6 h),治疗指数低,血药水平波动大以及蛋白水解迅速均会影响其疗效。此外,由于其在体内滞留时间短,未经修饰的IFNα-2b在治疗过程中需要多次剂量给药,易导致不良反应。目前主要通过聚乙二醇的化学偶联作用、纳米颗粒和微粒传递系统,来延长IFNα-2b的血清半衰期。常见的制备方法产生的微环境会在蛋白药物装载、微载体形成和干燥过程中损害其活性。本项目创新性地将反应性静电喷雾技术与离子响应性载药技术应用于蛋白质类大分子递药系统研究中,制备载重组人干扰素a-2b介孔肺靶向缓释微球。该制备工艺简单,产率较高,适合用于蛋白类制剂的工业化生产,为蛋白多肽类类药物缓释制剂的研究提供了新的方向。全文共分为以下五部分:一、综述本章首先对大分子蛋白药物—干扰素的概况及其制剂开发进行简要概述;其次简要概述了新型制备技术—静电喷雾技术的概况和应用;之后对离子交换技术在载药上的应用进行简要概述;最后,综述了载体—透明质酸钠的概况及其在药物传递系统中的应用。二、透明质酸钠介孔微球的制备及表征本章采用静电喷雾技术制备透明质酸钠介孔微球(SHMM),解决了透明质酸钠的双螺旋结构锁水能力在静电喷雾过程中的难题。首先,采用单因素试验考察溶剂、透明质酸钠的浓度、聚氧化乙烯的浓度、流速、电喷电压和针头内径等因素,从而确定透明质酸钠微球的最佳处方工艺,得到形态良好,粒径符合肺部被动靶向要求的微球。此外,通过单因素试验考察了致孔剂的浓度和烘干温度等因素,从而得到孔隙明显的介孔微球。所制的三批介孔微球孔隙率为(20.30±1.51)%,在水中均呈负电位,证明其具有较好的结合正电荷蛋白药物的能力,从而为后期离子交换载药提供可行性。三、透明质酸钠交联介孔微球的制备及表征针对透明质酸钠交联介孔微球(SHCMM)在水性环境交联和载药过程中溶解会破坏其物理形态的问题,本章采用反应性静电喷雾法一步式制备SHCMM,使得交联反应在静电喷雾过程中同时发生。以1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)为交联剂,以透明质酸钠的羟基为交联靶点,采用正交试验从而确定交联微球的最佳处方工艺。制得的交联微球形态良好,微球粒径分布在3~6μm。载药pH条件下的SHCMM具有较好的结合正电荷蛋白药物的能力,从而为后期离子交换载药奠定实验基础。通过FTIR和DSC对优化后的交联微球进行表征,从而验证BDDE与SH发生交联反应。本章建立了专属性和精密度良好的气相色谱法测定交联微球中残留交联剂含量,结果表明SHCMM的残留BDDE含量符合规定。采用MTT法评价SHCMM的生物相容性,结果表明其生物相容性较好。四、载重组人干扰素α-2b交联介孔微球的制备与表征本章以透明质酸钠交联介孔微球(SHCMM)作为一种特殊的可生物降解的离子交换材料,通过离子交换技术动态载药,制备得到高活性和高包封率的载重组人干扰素α-2b交联介孔微球(rhIFNα-2b-SHCMM)。本章建立考马斯亮蓝G-250染色法测定载药微球中蛋白药物的含量和体外释放度,其结果符合方法学测定要求。以载药量为评价指标,通过正交试验考察了进样液浓度、进样液的pH和流速对离子交换载药的影响,从而确定制备rhIFNα-2b-SHCMM的最佳处方工艺。rhIFNα-2b-SHCMM形态良好,粒径分布在3~6μm,Zeta电位为(-12.25±1.19)mV,包封率为(89.09±2.37)%。体外释放实验表明,rhIFNα-2b-SHCMM具有较好的缓释效果,24小时累计释放(86.26±1.29)%,通过模型拟合结果表明体外释放过程符合粒扩散(离子交换)释放机制。此外,差示扫描量热分析结果验证载药方式不是物理混合而是离子交换结合。圆二色光谱和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明离子交换载药及体外释放后,rhIFNα-2b-SHCMM释放液中rhIFNα-2b二级结构无明显变化。采用MTT实验评价rhIFNα-2b-SHCMM的抗肺癌生物学活性,rhIFNα-2b-SHCMM提取液保持90%以上的原液生物活性,初步证明其保持较高生物学活性。五、自制载药微球体内药动学及组织分布研究本章建立双抗体酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清及各组织中重组人干扰素α-2b浓度,该方法学符合体内分析测定要求。体内药动学结果显示,相较于原液,rhIFNα-2b-SHCMM的消除半衰期和平均滞留时间明显延长,这说明通过静电喷雾结合离子交换技术制备的rhIFNα-2b-SHCMM具有明显的缓释效果。组织分布结果可以看出,相较于rhIFNα-2b原液,rhIFNα-2b-SHCMM经尾静脉注射吸收后肺中分布显著提高,肺中rhIFNα-2b-SHCMM的浓度是rhIFNα-2b原液的1.77倍,说明rhIFNα-2b-SHCMM具有一定的肺部靶向性。