琼胶酶生产菌的筛选、鉴定及其产酶条件的优化

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利用琼胶作唯一碳源,从厦门近海海水中及大型经济海藻江蓠表面分离琼胶降解细菌,筛选得到10余株琼胶降解菌,对菌株的生理生化性质进行了初步研究。克隆其16S rDNA序列,进行分子鉴定并对其中一株高产琼胶酶菌株的产酶条件进行了优化。结果如下:(1)分离得到的琼胶降解菌从菌落形态上可以分为两大类:海水样品中筛选得到(QM1、QM3、QM4、QM6、QM10)的细菌在平板上生长时,分泌的胞外琼胶酶能使琼脂平板松软,在菌落周围产生凹陷或透明圈;从紫菜浸出液中筛选得到(QM2、QM5、QM7、QM8、QM9)的细菌在其菌落周围产生琼胶表面糊化现象;(2)琼胶降解菌理化性质分析结果表明:菌株QM1、QM4、QM5、QM8、QM9均能发酵葡萄糖并产酸;菌株QM5、QM8能产气;菌株QM1、QM4、QM5、QM8、QM9五个菌株均能发酵蔗糖并产酸,但是不产气,仅QM8能发酵乳糖并产酸。QM1、QM2、QM4为好氧菌;QM5和QM8厌氧菌;(3)通过16S rDNA的PCR扩增,得到长度为1.5 kb的片段,测序结果与Genbank数据库进行比对,确定其中的七株菌主要分布在Vibro、Pseudomonas及Proteobacteria等三个属中。其中,QM1与QM11分别鉴定为Vibrio sp. CF4-11和Vibrio shilonii strain SW-2,QM4为一株未培养的海洋细菌,而QM2、QM5、QM8、QM9则分别被鉴定为Pseudomonas sp. LB-2、Gamma proteobacterium B12、Pseudomonas stutzeri及Pseudomonas sp.hyss58;(4)对其中一株高产琼胶酶菌株(QM1)的最佳产酶条件(发酵时间、温度、pH、转速、琼脂浓度、NaCl浓度等)进行了优化,该菌株粗酶液的酶活为3.4 U/mL,最适发酵产酶条件为温度28°C,pH 7.5,转速150 r/m,琼脂浓度0.20%,NaCl浓度2.0%,发酵时间为36 h。从研究结果可以看出,厦门近海域拥有丰富的琼胶降解细菌资源,为将来琼胶酶的体外表达、酶活性的分析检测及琼胶酶的开发利用奠定了基础。
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