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目的:通过Cell-SELEX技术来获得高特异性、高亲和力结合于人胶质瘤细胞SHG44而不结合于人正常星形神经胶质细胞SVGp12的核酸适配体。方法:通过DNA合成仪人工合成一个长度为80个碱基,数量约为1013-1014条的单链寡核苷酸文库。该文库核苷酸的5’端和3’端各20个碱基分别为已知的正反引物互补序列,中间的40个碱基为DNA合成过程中的随机序列。然后将人工合成的单链DNA文库与人正常星形神经胶质细胞SVGp12孵育,充分孵育,收集不结合于人正常星形神经胶质细胞SVGp12膜表面的核酸序列,然后将上述收集的序列再次与人胶质瘤细胞SHG44孵育,分离获得那些结合于人胶质瘤细胞SHG44胞膜表面的核酸序列,最后把这些单链核酸进行PCR扩增富集用于下一轮筛选的DNA文库,这样第二轮的DNA筛选文库对人胶质瘤细胞SHG44的结合力会比第一轮强,而对人正常星形神经胶质细胞SVGp12的结合力则越来越弱。因此经过数轮反复的筛选、扩增从而获得对人胶质瘤细胞SHG44的结合力达到饱和状态的核酸文库。通过对最后一轮DNA文库进行克隆测序70条序列,对比测序结果,挑选出重复率较高的几条DNA序列进行批量合成并进行表征。再挑选出对正筛细胞结合力最强,反筛结合力弱,结构最稳定的一条单链DNA序列进行序列的优化,从而得到碱基长度最短的一条核酸适配体。最后利用流式细胞仪、荧光共聚焦显微镜等设备考察该核酸适配体对靶细胞人胶质瘤细胞SHG44的亲和力、特异性、细胞结合靶点的性质以及生理温度37℃条件下的稳定性等。结果:1、利用Cell-SELEX技术,经过10轮的筛选、序列优化、序列的表征获得了一条高特异性,高亲和力结合于人胶质瘤细胞SHG44的核酸适配体S6-1-B。2、核酸适配体S6-1-B长度为53个碱基,二级结构稳定,对人胶质瘤细胞SHG44的结合能力相比于原始库达到了8-12倍的荧光偏移。3、这条核酸适配体在生理温度37℃条件下仍保留了其人胶质瘤细胞SHG44的高特异性和高亲合力。4、核酸适配体S6-1-B结合于靶细胞SHG44的细胞膜上,其结合靶点是蛋白类物质。5、FAM和HS-SH-T-Spacer9-Biotin修饰的核酸适配体S6-1-B仍保留了对靶细胞较好的特异性及较高的亲和力,利用修饰后的核酸适配体S6-1-B来初步甄定人胶质瘤细胞SHG44胞膜表面生物标志物。6、用核酸适配体S6-1-B携带化疗药物阿霉素对人胶质瘤细胞SHG44进行了初步的靶向药物治疗实验。结论:我们成功筛选获得了人胶质瘤细胞SHG44的特异性核酸适配体S6-1-B。对核酸适配体S6-1-B进行修饰,初步应用于生物标志物的甄定及靶向药物治疗。本研究进一步完善了脑胶质瘤各类型细胞的特异性核酸适配体家族谱。利用筛选获得的核酸适配体的高特异性、高亲和力,以及结合靶点为蛋白质类物质的特点,可将核酸适配体S6-1-B作为探针应用于脑胶质瘤的细胞成像、靶向药物的运输、生物标志物的甄别和肿瘤预后评估等领域的研究。