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研究目的检测VEGF-C、VEGF-D和STAT3在胃癌组织及其相应癌旁正常组织中的表达情况及差异;检测AGS、SUN-1、KATO-III、BGC-823、MGC-803、SGC-7901和HGC-27各胃癌细胞系及GES-1正常细胞系中STAT3和VEGF-D的表达情况及差异。探讨VEGF-C和VEGF-D在STAT3作用下促进淋巴管生成机制的研究。研究方法收集我院2005年1月分到2006年12月分期间行胃癌根治手术,经病理学证实为腺癌并且具有完整随访资料的107例患者的癌组织和相应癌旁正常组织标本。酶免疫组织化学染色检测VEGF-C、VEGF-D和STAT3的表达情况并分析其与胃癌临床病理特征及预后之间的关系。RT-PCR法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中VEGF-C、VEGF-D和STAT3基因水平上的差异;Western Blot检测AGS、SUN-1、KATO-III、BGC-823、MGC-803、SGC-7901和HGC-27各胃癌细胞系及GES-1正常细胞系中VEGF-C、VEGF-D和STAT3的蛋白表达及差异。STAT3在siRNA转染之后,基因微阵列检测VEGF-C和VEGF-D mRNA变化情况。研究结果1、在107例胃癌组织标本中,VEGF-C的阳性表达率为38.3%(41/107),明显高于相应癌旁正常组织20.6%(22/107);VEGF-D的阳性表达率为43.9%(47/107),明显高于相应癌旁正常组织14.0%(15/107)。STAT3的阳性表达率高达62.6%(67/107),而癌旁相应正常组织阳性表达率仅仅为8.4%(9/107)。P-STAT3的阳性表达率为38.3%(41/107),明显癌旁高于相应正常组织1.9%(2/107)。VEGF-C、VEGF-D、STAT3及p-STAT3在胃癌组织中的表达均明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(pVEGF-C=0.009,pVEGF-D=0.031,p STAT3=0.035,p p-STAT-3=0.014)。2、对107例胃癌患者进行生存分析显示:性别、N分期,淋巴结转移范围、VEGF-C、VEGF-D、STAT-3和磷酸化STAT3阳性表达与本组胃癌患者的预后密切相关,差异有统计学意义(p<0.05)。Kaplan-Meier法多生存分析显示p-STAT3阳性表达(HR=0.431,p<0.001)和N分期(HR=1.570,p<0.001)是本组胃癌患者预后的独立危险因素(p<0.05)。3、在107例胃癌中,vegf-c、vegf-d和stat3基因mrna的相对表达量均明显高于相应癌旁正常组织,差异具有统计学意义(2.26±0.83vs0.40±0.12,pvegf-c=0.007;1.26±0.55vs0.75±0.29,pvegf-d=0.041;3.15±1.32vs1.13±0.64,pstat3=0.004)。4、stat3基因mrna的相对表达量在ags、sun-1、kato-iii、bgc-823、mgc-803、sgc-7901和hgc-27胃癌细胞系中均明显高于ges-1正常细胞系,差异有统计学意义(pags=0.014,psun=0.020,pkato-iii=0.026,pbgc-823=0.023,pmgc-803=0.019,psgc-7901=0.018,phgc-27=0.014)。在ags、sun-1、kato-iii、bgc-823、mgc-803、sgc-7901和hgc-27胃癌细胞系中,vegf-d基因mrna的相对表达量亦均明显高于ges-1正常细胞系,差异有统计学意义(pags=0.012,psun=0.025,pkato-iii=0.017,pbgc-823=0.015,pmgc-803=0.009,psgc-7901=0.014,phgc-27=0.007)。而vegf-d基因mrna在各胃癌细胞系中的相对表达量未见明显高于ges-1正常细胞系,差异无统计学意义(pags=0.064,psun=0.435,pkato-iii=0.108,pbgc-823=0.058,pmgc-803=0.235,psgc-7901=0.083,phgc-27=0.072)。5、相关性分析显示胃癌转移淋巴结个数与vegf-c、vegf-d、stat3、p-stat3的表达显著相关(pvegf-c=0.062、pvegf-d=0.034、pstat3=0.021、pp-stat3=0.004)。其中stat3的表达与vegf-c(p=0.106)、vegf-d(p=0.025)的表达显著相关;而p-stat3的表达只与vegf-d的表达相关。在107胃癌患者mrna相对表达量的相关分析中,淋巴结转移数目与stat3mrna(p=0.018),vegf-cmrna(p=0.045)和vegf-dmrna(p=0.037)的相对表达量均显著相关。进一步分析发现stat3mrna的相对表达量与vegf-dmrna的相对表达量亦显著相关(p=0.003)。6、sirna干扰stat3的表达后,vegf-c和vegf-d在hgc-27胃癌细胞中的蛋白表达量相对于对照组分别减少20%-30%和70%-80%。经rna微阵列证实,在sirna干扰stat3基因表达的hgc-27胃癌细胞中,5295基因的表达显著减少,vegf-c和vegf-d的表达也显著下降。在sirna干扰后的hgc-27胃癌细胞vegf-c的rna下降量为对照组的1.036倍,而vegf-d的下降量则为对照组的5.568倍。实验结论1、VEGF-C、VEGF-D和STAT3在胃癌组织和各胃癌细胞系中的表达均明显高于相应癌旁正常组织。2、性别、淋巴结转移个数、淋巴结转移范围、VEGF-C蛋白表达、VEGF-D蛋白表达、STAT3蛋白表达和p-STAT3蛋白阳性表达对本研究中胃癌患者的预后有影响。p-STAT3蛋白表达和N分期是本组胃癌患者预后的独立危险因素。3、在AGS、SUN-1、KATO-III、BGC-823、MGC-803、SGC-7901和HGC-27胃癌细胞系中,VEGF-C、VEGF-D和STAT3在蛋白水平和mRNA水平的表达均明显高于GES-1胃正常细胞系。4、胃癌淋巴结转移个数与VEGF-C、VEGF-D、STAT3、p-STAT3在蛋白水平和mRNA表达水平上均显著相关。VEGF-C、VEGF-D在蛋白及mRNA表达水平上与STAT3的表达亦均显著相关。5、干扰STAT3的表达后,VEGF-C、VEGF-D在蛋白及mRNA表达水平上均下调,尤以VEGF-D下调最显著。STAT3是通过上调VEGF-D的表达来促进淋巴管的生成进而导致淋巴结的转移。