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研究目的：肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)在全球恶性肿瘤致死率中排第二位。在亚洲国家,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus)感染是HCC的主要发病原因,但随着预防性乙肝疫苗的接种,HBV相关HCC的发病率已呈下降趋势。越来越多的研究表明,由脂质代谢异常导致的非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)逐渐成为HCC的独立危险因素。同时,脂代谢异常也是实体肿瘤的重要表型,调控肿瘤相关基因的表达。肿瘤发展到一定程度就会向周围传播,肿瘤细胞的浸润、转移离不开上皮细胞向间质细胞的转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)。EMT包括三种类型：第一种类型是上皮-间叶细胞转化,第二种类型是上皮-成纤维细胞转化,第三种类型是肿瘤-转移瘤转化。诱导EMT的分子分为五大类：第一类细胞表面蛋白,如N-cadherin、E-cadherin,第二类细胞骨架标志物,如Vimentim、,第三类胞外基质蛋白,如纤粘连蛋白、层粘连蛋白,第四类转录因子,如Snail、TGF-β,第五类microRNAs,如miR-21。本研究拟系统分析HCC患者体内血脂水平,重点研究总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度胆固醇(high density cholesterol, HDL-CHO)、低密度胆固醇(low density cholesterol, LDL-CHO)与HCC分级、转移、肿瘤大小、HBV相关HCC的关系。进一步检测HCC组织中EMT相关分子的表达情况,初步探讨异常胆固醇诱导EMT参与HCC转移的途径,为阐明脂质代谢异常相关HCC的转移机制提供实验依据。研究方法一、HCC标本收集和分组1、收集山东大学附属省立医院2011年1月-2015年1月期间的HCC标本451例,其中男性388例,女性63例,年龄24-80岁,平均年龄53.8±26.2岁。所有HCC患者术前均未进行放疗或化疗,病理结果均为肝细胞肝癌并按分化程度分为Ⅰ、ⅡⅢ级。2、分组如下：转移组72例,未转移组375例；Ⅰ级45例,Ⅰ～Ⅱ级24例,Ⅱ级272例,Ⅱ～Ⅲ级69例,Ⅲ级39例；>5CM的大肝细胞肝癌277例,<5CM的小肝细胞肝癌199例；HBV阳性肝细胞肝癌组214例,HBV阴性肝细胞肝癌组38例。二、HCC患者血清学检测术前收集HCC患者空腹静脉血2-5m1,分离血清,贝克曼AU5800生化分析仪酶比色法检测定量检测。TC、HDL-CHO LDL-CHO,罗氏E601电化学发光法半定量检测HBsAg。三、HCC标本免疫组织化学染色在转移和未转移的肝细胞肝癌组中各选取7份标本,病理分级涵盖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级；以转移组和未转移组中TC、HDL-CHO、LDL-CHO的平均水平为筛选参考,转移组选取模式为TC高、HDL-CHO低、LDL-CHO高,未转移组选取模式为TC低、HDL-CHO高、LDL-CHO·低。免疫组织化学检测肝细胞肝癌组织中EMT相关分子TGF-β、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达。四、统计分析采用SPSS13.0统计软件对数据进行分析。不同病理分级间比较采用单因素方差分析,有显著性差异时运用LSD法进行两两比较；两样本间比较采用t检验。P<0.05,具有统计学意义。研究结果一、TC、HDL-CHO、LDL-CHO在肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的表达差异1.对肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的TC数据进行单因素方差分析可知,F=0.776,p=0.567>0.05,尚不能认为TC在肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的表达差别有统计学意义。2.对肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的HDL-CHO数据进行单因素方差分析可知,F=2.716, p=0.02<0.05, HDL-CHO在肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的表达差别有统计学意义,运用LSD法进行两两比较,发现Ⅱ与Ⅲ级之间HDL-CHO表达差别有统计学学意义(p=0.001<0.05),Ⅱ-Ⅲ与Ⅲ级HDL-CHO表达差别有统计学学意义(p=0.005<0.05)3.对肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的LDL-CHO数据进行单因素方差分析可知,F=0.862,p=0.506>0.05,尚不能认为LDL-CHO在肝细胞肝癌患者不同病理分级之间的表达差别有统计学意义。二、TC、HDL-CHO、LDL-CHO与肝细胞肝癌转移的相关性1、肝细胞肝癌患者转移组和未转移组TC数据进行两样本t检验,t=1.972,p=0.049<0.05,差别有统计学意义,肝癌发生转移与否可能与TC表达量有关,TC高者可能更易发生肝癌转移。2、肝细胞肝癌患者转移组和未转移组HDL-CHO数据进行两样本t检验,t=86.92,p=0.038<0.05,差别有统计学意义,肝癌发生转移与否可能与HDL-CHO表达量有关,HDL-CHO低者可能更易肝癌发生转移。3、肝细胞肝癌患者转移组和未转移组LDL-CHO数据进行两样本t检验,t=2.057,p=0.043<0.05,差别有统计学意义,肝癌发生转移与否可能与LDL-CHO表达量有关,LDL-CHO高者可能更易肝癌发生转移。4、受选取标本选择和数量所限,暂未发现两组标本间TGF-β、E-cadherin、 Vimentin、N-cadherin存在表达差异。三、TC、HDL-CHO、LDL-CHO在大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间的表达差异1、在大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间TC数据进行两样本t检验,t=1.268,p=0.04206>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间TC表达量差别有统计学意义。2、在大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间HDL-CHO数据进行两样本t检验,t=1.954,p=0.051>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间HDL-CHO表达量差别有统计学意义。3、在大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间LDL-CHO数据进行两样本t检验,t=1.705,p=0.089>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为大肝细胞肝癌和小肝细胞肝癌患者之间LDL-CHO表达量差别有统计学意义。四、TC、HDL-CHO、LDL-CHO在伴HBV感染肝细胞肝癌患者和无HBV感染肝细胞肝癌患者之间的表达差异1.在HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之间TC数据进行两样本t检验,t=0.148,p=0.883>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之间TC表达量差别有统计学意义。2.在HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之间HDL-CHO数据进行两样本t检验,t=1.236,p=0.218>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之间HDL-CHO表达量差别有统计学意义。3.在HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之问LDL-CHO数据进行两样本t检验,t=0.125,p=0.901>0.05,差别无统计学意义,尚不能认为HBV阳性肝细胞肝癌患者和HBV阴性肝细胞肝癌患者之间LDL-CHO表达量差别有统计学意义。研究结论：1.肝细胞肝癌患者不同病理分级可能与HDL-CHO表达量有关,HDL-CHO越高,分化越好。2.肝癌发生转移与否可能与TC表达量有关,TC高者可能更易发生肝癌转移。3.肝癌发生转移与否可能与HDL-CHO表达量有关,HDL-CHO低者可能更易肝癌发生转移。4.肝癌发生转移与否可能与LDL-CHO表达量有关,LDL-CHO高者可能更易肝癌发生转移。