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目的:化疗耐药是胃癌(尤其晚期胃癌)患者治疗失败最常见和最难克服的问题之一,也是肿瘤复发、转移的主要原因。本课题组前期研究发现CLIC1的表达水平与胃癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期及侵袭与迁移能力密切相关,CLIC1是胃癌基因治疗的一个潜在的靶点。前期实验发现CLIC1在胃癌耐药细胞SGC-7901/VCR和其分泌的外泌体中高表达。我们推测CLIC1可能和肿瘤耐药相关。因此,本课题通过提取SGC-7901/VCR的外泌体作用于正常胃癌细胞SGC-7901,检测其对长春新碱的耐药情况和CLIC1表达水平的改变,同时沉默CLIC1基因在SGC-7901/VCR中的表达来检测该细胞对长春新碱的耐药情况,和外泌体中CLIC1对胃癌耐药的作用。方法:CCK-8测定SGC-7901和SGC-7901/VCR对长春新碱的耐药性,qRT-PCR测定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1基因的表达情况;Western Blot和免疫荧光测定SGC-7901和SGC-7901/VCR中CLIC1蛋白的表达情况。提取SGC-7901/VCR和SGC-7901的外泌体,在电子显微镜下鉴定外泌体的形态;Western Blot法鉴定外泌体;BCA法测定蛋白质浓度;qRT-PCR法测定外泌体中CLIC1基因的表达情况。沉默SGC-7901/VCR CLIC1基因表达(SGC-7901/VCR-CLIC1-kd)。qRT-PCR和Western Blot分别测定两种细胞CLIC1基因和蛋白的表达情况;CCK-8测定两种细胞对耐长春新碱的耐药性。将SGC-7901/VCR分泌的外泌体共培养于SGC-7901细胞,得到SGC-7901/exo。观察SGC-7901、SGC-7901/VCR、SGC-7901/exo细胞形态改变情况;CCK-8测定SGC-7901和SGC-7901/exo对长春新碱的耐药性;qRT-PCR测定SGC-7901和SGC-7901/exo的CLIC1基因的表达情况;Western Blot和免疫荧光检测SGC-7901和SGC-7901/VCR/exo的CLIC1蛋白的表达情况。结果:CLIC1基因和蛋白水平在SGC-7901/VCR中高表达。在电子显微镜下看到外泌体呈明显的典型的椭圆形杯口状结构,直径40-100nm;外泌体标志蛋白HSP-70有表达;在相同体积细胞上清液中,SGC-7901/VCR分泌的外泌体(V-exo)要多于SGC-7901;qRT-PCR测定两种细胞分泌的外泌体均表达CLIC1基因,但SGC-7901/VCR高表达。qRT-PCR和Weston blot检测SGC-7901/VCR-CLIC1-kd中CLIC1均呈低表达,CCK-8测定两种细胞显示SGC-7901/VCR-CLIC1-kd对长春新碱耐药性降低。耐药细胞株外泌体共培养细胞SGC-7901/exo形态相对于亲代细胞SGC-7901发生了明显的改变,形态学向耐药细胞方向改变;qRT-PCR结果显示相对于SGC-7901 CLIC1基因在SGC-7901/exo中高表达;Western Blot和免疫荧光测定CLIC1蛋白水平得到同样的结果。结论:(1).SGC-7901/VCR在基因和蛋白水平相对于SGC-7901高表达。(2).SGC-7901/VCR分泌的外泌体多于SGC-7901分泌的外泌体,且SGC-7901/VCR分泌的外泌体高表达CLIC1。(3).CLIC1可以介导长春新碱耐药株的耐药性,沉默CLIC1能降低其对长春新碱的耐药性。(4).SGC-7901/VCR分泌的外泌体携带有CLIC1基因,且可以将其传给敏感细胞株,增加其对长春新碱的耐药性。