论文部分内容阅读
质子感知卵巢癌G蛋白偶联受体1(OGR1)属于G蛋白偶联受体超家族OGR1亚家族4个成员(TDAG8,OGR1,G2A和GPR4)之一,在肿瘤及炎性等病理酸性条件下被激活而调节细胞的生理病理过程。病理酸性微环境的形成与细胞的糖酵解途径增强有关,而这个过程是由低氧诱导因子(HIF)的过度激活及其诱导多种靶基因的表达来决定的。我们对肿瘤大数据进行分析研究后发现,HIF诱导的基因中也包含OGR1,所以我们推测OGR1可能与肿瘤细胞适应低氧或酸性环境的生存能力有关。在该研究中我们将探索OGR1与肿瘤在酸性环境中存活、转移和凋亡等复杂生物学特性之间的关系,阐明OGR1的生理功能和病理机制,为肿瘤细胞抵抗酸性的本质方面以及在肿瘤治疗战略方面提出新的观点。在研究中,首先克隆了人类OGR1基因并构建OGR1原核表达载体。继而又构建OGR1真核表达质粒pHBLV-CMV-EF1中。通过酶消化和测序鉴定确认正确后。用lipofectamine2000将质粒转染到A549肺癌细胞株中。用实时荧光定量PCR基因检测技术来检测A549细胞中外源ORG1基因的表达。用Western Blot法检测蛋白表达;在研究OGR1对肿瘤细胞功能的影响实验中,分别用MTT法检测细胞的增殖活性,用Trans-well法测定细胞的迁移能力和用流式细胞技术测定了细胞的凋亡。为了证明OGR1在体内肿瘤生长的影响,我们分别用OGR1稳定表达和空载体转基因的A549细胞来源的肿瘤荷瘤裸鼠模型,比较了肿瘤体积。实验结果表明,我们成功构建ORG1基因稳定表达的肺癌细胞A549模型。OGR1对肿瘤细胞功能的实验显示。OGR1对肺癌细胞A549的增殖与迁移没有明显的作用,OGR1能够提高肿瘤细胞的抗凋亡能力而提高体内肿瘤的发展。作为结论,OGR1在酸性条件下被激活后对肺癌细胞的增值与迁移中没有明显的作用,但由于能够提高肿瘤细胞的抗凋亡能力,从而提高体内肿瘤的生长,显示出促进肿瘤性的受体。研究结果提示,中和肿瘤的酸性微环境及研发OGR1受体拮抗剂有望成为治疗肺肿瘤的新思维。