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本文通过应用基质辅助激光解吸离子化—傅立叶变换质谱(MALDI-FTMS)技术监测肾移植患者尿样中小分子物质的变化趋势,为肾移植尿代谢组学的研究奠定了基础。文中对亲属活体肾移植的供体和受体恢复过程同时进行了研究和对比,并发现了尿液中一些特异性的小分子。同时,对患有急性细胞型排斥的病人以及肾移植后未出现排斥的病人的尿液也进行了对比研究,主成分分析(PCA)载荷图显示这两种病人的样品点出现在不同的区域,t检验发现了全扫描质谱图中具有显著差异性的峰,该检测方法的应用使肾移植术后发生急性细胞型排斥性反应的患者尿样得到了有效识别。
笔者用MALDI-FTMS作为一种非侵入性的方法监测了亲属活体肾移植患者的尿液,反映了其移植肾的术后恢复过程。应用主成分分析方法,做出载荷图来描述受体患者的健康状态,这些图显示了四例受体患者术后的缓慢肾功能恢复,同时,还对两例供者的术后恢复进行了研究,同样显示了术后的缓慢肾功能恢复。MALDI-FTMS为监测移植术后的缓慢肾功能恢复提供了一种快速诊断方法,并可能成为除临床医学中常用的监测血肌酐指标外的又一种反映肾功能状态的有效手段。
本文应用MALDI-FTMS作为一种非侵入性的方法监测了肾移植术后急性细胞型排斥患者的尿液,分析了6名经医学病理活检明确诊断的不同等级的发生亚临床及临床急性细胞型排斥反应(Banff97’I a to II b)的肾移植患者的18个尿样以及8名移植后未排斥的24个尿样。筛选出了一些具有很高的临床诊断价值的小分子物质。总之,实验发现MALDI-FTMS技术可以用于检出肾移植患者术后早期尿液中高度提示排斥反应发生的一些小分子物质,从而为深入研究肾移植尿代谢组学创造了条件,使得临床上早期识别及预防肾移植术后的急性细胞型排斥反应获得理论依据;同时,该方法可能发展成为一种具有早期临床诊断价值的检验肾移植患者术后是否发生急性细胞型排斥反应的非侵入性手段。
本文希望通过应用稳定同位素标记的方法对尿中未定性且特异性提示排斥反应的小分子物质进行定性及相对定量分析。拟设计一类以硫/二硫键交换反应为基础的巯基标记试剂,此类试剂仅与巯基发生反应,而不与其他氨基酸中存在的活性基团发生作用,对含巯基的半胱氨酸和还原后的溶菌酶修饰进行了尝试,还未得到满意的结果。如此类修饰试剂开发成功,将在今后的尿样小分子识别中发挥重要的作用。